Stomoxys calcitrans, a mosca-dos-estábulos, é um inseto hematófago obrigatório e ambos os sexos se alimentam de sangue para sobrevivência e reprodução. É um ectoparasita de importância veterinária e econômica e devido a sua picada dolorosa e por ser vetor mecânico de vários patógenos causa estresse, doenças e grandes prejuízos econômicos à indústria de carne e leite. Este panorama está diretamente ligado a resíduos de produção da indústria sucroalcooleira e material orgânico em excesso como esterco aviário e de bovinos. O controle dessa espécie baseia-se majoritariamente no uso de inseticidas sintéticos, cujo uso contínuo e ineficaz tem favorecido o aumento de indivíduos resistentes, além do impactado no meio ambiente e a saúde humana e animal. Com isso, compostos naturais advindos de óleos essenciais como de Origanum vulgare L. e Thymus vulgaris L., além de seus compostos majoritários carvacrol e timol têm se mostrado como alternativa promissora nas suas atividades ectoparasiticidas na literatura científica atual. O presente estudo foi realizado através do teste de aplicação tópica em adultos de S. calcitrans, analisando a longevidade e mortalidade de machos e fêmeas e calculado o LD50 e LD90 de cada composto. Os valores obtidos foram para O. vulgare L de LD50 de 4424,65 ppm e T. vulgaris (L.) com 32178,12 ppm em 24h e seus respectivos compostos majoritários carvacrol possuindo o LD50 de 65575,63 ppm e o timol com 1823, 61 ppm. Além disso, os compostos promovem alterações comportamentais com comprometimento do sistema nervoso. Foi realizada a análise da influência dos compostos com parâmetros reprodutivos, como oviposição, empupamento e emergência de adultos. A segurança dos óleos essenciais de orégano e tomilho, bem como o carvacrol e timol foi avaliada através de citotoxicidade para células de mamíferos, sendo o timol o mais seguro após 48h de tratamento. Por esse motivo e porque apresentou os melhores resultados de DL50 e DL90, causando maior mortalidade de adultos em 24 horas., o timol foi selecionado para ser formulado pelo estudo. A formulação desenvolvida foi CE (concentrado emulsionável), tendo sido acompanhada sua estabilidade e pH como respectivos testes de validação da formulação. Como perspectivas futuras a formulação com o timol pode e deverá ser testada em contextos de surtos de S. calcitrans tanto no ambiente com nas infestações de adultos em animais, para assim, se candidatar como possível novo bioinseticida.

As bactérias das famílias Anaplasmataceae e Mycoplasmataceae representam importantes agentes infecciosos na medicina veterinária, capazes de infectar cães e gatos domésticos e causar alterações hematológicas que variam de infecções subclínicas a manifestações clínicas mais graves. O diagnóstico baseado exclusivamente na avaliação citológica apresenta sensibilidade limitada, tornando as técnicas moleculares essenciais para a detecção desses microrganismos. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de Ehrlichia spp., Anaplasma spp. e Mycoplasma spp. em cães e gatos atendidos em um hospital veterinário no município de Seropédica, Rio de Janeiro, por meio de métodos moleculares, bem como avaliar possíveis associações com alterações hematológicas. Foram analisadas 310 amostras de sangue, sendo 177 de cães e 133 de gatos, submetidas à extração de DNA e à detecção molecular por PCR convencional, nested PCR e PCR em tempo real, direcionadas à amplificação de regiões do gene 16S rRNA de agentes dos gêneros Mycoplasma, Ehrlichia e Anaplasma. A análise molecular revelou positividade para hemoplasmas em 6,45% (20/310) das amostras, com maior frequência em animais do sexo masculino, enquanto nenhuma amostra foi positiva para Anaplasma phagocytophilum. A avaliação citológica não permitiu a identificação de hemoparasitos, evidenciando a baixa sensibilidade desse método. A análise hematológica não demonstrou associação significativa entre a infecção e alterações nos parâmetros hematológicos, indicando potencial subdiagnóstico na ausência de métodos moleculares. Os resultados evidenciam a circulação de hemoplasmas e bactérias da família Anaplasmataceae na região estudada e reforçam a importância do diagnóstico molecular. Este estudo contribui para o entendimento da epidemiologia e do impacto hematológico desses agentes em animais domésticos, destacando a necessidade de vigilância molecular contínua e de abordagens diagnósticas mais sensíveis na prática clínica veterinária.

Os carrapatos são artrópodes vetores de diversos patógenos e podem representar um risco significativo para a saúde pública, especialmente em áreas de interface entre fragmentos florestais e fluxo humano, como Unidades de Conservação (UCs) voltadas ao ecoturismo. Diante desse contexto, o objetivo deste trabalho foi realizar um levantamento da diversidade e distribuição espacial de carrapatos em trilhas de duas UCs no estado do Rio de Janeiro, seguido da detecção molecular de Rickettsia spp. A metodologia consistiu na realização de pesquisas acarológicas através dos métodos de bandeiramento, arrasto e walking trap em trilhas situadas na Reserva Ecológica de Guapiaçu (Cachoeiras de Macacu) e na Área de Relevante Interesse Ecológico Floresta da Cicuta (Volta Redonda). Espécimes em fase de vida adulta e de ninfa foram identificados morfologicamente a nível de espécie, enquanto larvas foram identificadas a nível de gênero. A extração de DNA utilizou o método HotSHOT, com reextração por fenol-clorofórmio em amostras em que não houve amplificação. Para obter dados completos quanto a diversidade de espécies, foi utilizada a técnica de Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) para identificação de larvas a nível de espécie e confirmação da identificação de ninfas. A técnica foi realizada a partir da amplificação dos genes 16S rDNA e COI e a digestão enzimática através das endonucleases de restrição DraI e VspI e PstI e MboI, respectivamente. A pesquisa de infecção e coinfecção de Rickettsia spp. envolveu ensaios de PCR convencional, nested PCR e PCR-RFLP, com os genes-alvo gltA, ompA, ompB, sca2 e sca9. Foram coletados 582 carrapatos distribuídos entre seis espécies: Amblyomma calcaratum, Amblyomma sculptum, Amblyomma dubitatum, Amblyomma varium, Amblyomma ovale e Ixodes loricatus. A positividade das amostras variou de acordo com o gene pesquisado para Rickettsia. Para o gene gltA, realizado por PCR convencional, 62 e 41 amostras de A. varium foram positivas para os fragmentos de 401 pb e 834 pb, respectivamente. Nas nested PCRs para o Grupo Febre Maculosa, ompA (360 pb) e ompB (511 pb), detectou-se positividade em 69 e 60 amostras de A. varium, respectivamente, e em um espécime de A. ovale. A PCR-RFLP e o sequenciamento identificaram Rickettsia parkeri cepa Mata Atlântica em A. ovale e Rickettsia amblyommatis em A. varium. Adicionalmente, nested PCRs para sca2 (764 pb) e sca9 (727 pb) detectaram Rickettsia bellii no único espécime de I. loricatus e nos dois espécimes de A. ovale, revelando uma coinfecção por R. parkeri cepa Mata Atlântica e R. bellii em uma larva de A. ovale. Este estudo apresenta o primeiro relato de R. amblyommatis em A. varium na região Sudeste e os primeiros relatos de R. bellii em I. loricatus e de coinfecção em A. ovale no Rio de Janeiro. Conclui-se que a associação das técnicas de nested PCR e PCR-RFLP representa uma estratégia eficaz e de baixo custo para a identificação de larvas e detecção de coinfecções rickettsiais. A aplicação dessas metodologias permite uma caracterização epidemiológica mais robusta, revelando interações patógeno-hospedeiro que frequentemente permanecem subestimadas.

O carrapato Rhipicephalus microplus representa um dos principais entraves à pecuária bovina, gerando prejuízos econômicos acentuados e demandando o uso intensivo de acaricidas, o que tem culminado na seleção de populações multirresistentes. Diante deste cenário, o fluralaner, uma isoxazolina de ação sistêmica, surge como uma alternativa promissora. Considerando o papel central dos hemócitos na homeostase dos ixodídeos, a caracterização de sua cinética e viabilidade torna-se um parâmetro fundamental para mensurar a resposta biológica desses artrópodes frente à exposição a novas moléculas acaricidas, conforme delineado nos ensaios a seguir. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do fluralaner sobre a resposta celular de fêmeas ingurgitadas de R. microplus, focando na contagem total, contagem diferencial e e viabilidade dos hemócitos. Inicialmente, realizou-se a padronização metodológica comparando a contagem total de hemócitos em pools de hemolinfa e em amostras individuais. Embora não tenham sido observadas diferenças estatísticas na concentração celular final (4,93 x 106 cél. /mL e 4,73 x 106 cél. /mL, respectivamente), a coleta individual apresentou maior variabilidade. Na contagem diferencial, identificaram-se os tipos celulares presentes na hemolinfa, mantendo-se a estabilidade das proporções na maioria dos grupos tratados, com exceção de uma redução pontual na concentração de 0,5 μg/mL às 24 horas. Os ensaios de viabilidade pelo teste de exclusão com azul de tripan demonstraram que o fluralaner, nas concentrações e tempos testados, não induziu citotoxicidade imediata aos hemócitos circulantes, sugerindo que o mecanismo de ação da molécula sobre a reprodução e sobrevivência do carrapato pode não estar diretamente ligado à lise hemocitária primária. Estes resultados contribuem para o entendimento celular do carrapato sob estresse químico e auxiliam na validação de protocolos experimentais para estudos de fisiologia celular em ixodídeos.

A erliquiose monocítica canina, causada por Ehrlichia canis, representa importante enfermidade de relevância clínica e epidemiológica em regiões tropicais e subtropicais, incluindo o Brasil. O presente estudo teve como objetivo isolar, propagar e caracterizar molecularmente cepas de E. canis obtidas de cães naturalmente infectados no estado do Rio de Janeiro, avaliando aspectos diagnósticos, biológicos e filogenéticos dos isolados. Foram analisados três cães com sinais clínicos compatíveis com infecção por agentes transmitidos por carrapatos, cujas amostras sanguíneas foram submetidas a exame hematológico, avaliação microscópica, detecção molecular por PCR e isolamento em linhagens celulares de Ixodes scapularis (IDE8 e ISE6). A observação de mórulas intracelulares em esfregaços sanguíneos permitiu triagem inicial das amostras, posteriormente confirmadas por PCR direcionada aos genes 16S rDNA, dsb, p28 e trp36. O isolamento de três novas cepas (E.canisPretinha, E.canisLyon e E.canisScooby) foi bem-sucedido em células embrionárias de carrapato, sendo esse o primeiro isolamento in vitro de E. canis no Brasil em linhagem IDE8 e propagação em linhagem ISE6. A partir de análise descritiva, foram observadas diferenças na intensidade de infecção entre as cepas, com destaque para maior infectividade in vitro da cepa E.canisPretinha. As análises filogenéticas baseadas nos genes 16S rDNA e dsb demonstraram elevada conservação genética, confirmando a identidade das amostras como E. canis. Por outro lado, os genes p28 e trp36 evidenciaram variabilidade genética entre os isolados. Duas cepas agruparam-se com o genogrupo americano (TEDSVSAPA), enquanto uma cepa apresentou padrão compatível com o genogrupo brasileiro, identificado pela repetição em tandem ASVVPEAE no gene trp36. Os achados demonstram a co-circulação de diferentes genogrupos de E. canis no estado do Rio de Janeiro e reforçam a importância da utilização combinada de marcadores moleculares conservados e variáveis para diagnóstico, isolamento e caracterização epidemiológica do agente. Além disso, o emprego de cultivo celular de linhagens derivadas de carrapatos demonstrou ser uma estratégia eficiente para o isolamento de novas cepas brasileiras de E. canis, constituindo ferramenta promissora para o desenvolvimento de investigações futuras voltadas à diversidade genética, biologia e interação patógeno-vetor.

Ehrlichia canis é uma bactéria Gram-negativa, intracelular obrigatória, responsável pela Erliquiose Monocítica Canina (EMC), cuja transmissão ocorre por Rhipicephalus linnaei no Brasil. Sua distribuição é descrita em todas as regiões do país. Estudos envolvendo E. canis têm identificado proteínas imunorreativas que apresentam antígenos espécie-específicos e estão relacionadas à interação parasito-hospedeiro, fornecendo informações relevantes sobre a diversidade genética do patógeno. Nesse contexto, o presente estudo objetivou analisar a prevalência e a diversidade genética de E. canis, utilizando os genes p28 e trp36, em amostras de sangue total de cães naturalmente infectados oriundos da microrregião de Unaí, Minas Gerais. Foram analisadas 386 amostras de sangue total de cães por meio de técnicas moleculares baseadas nos genes p28 e trp36. Das amostras avaliadas, 3,1% (12/386) apresentaram amplificação para o gene p28 de E. canis. Entre as amostras positivas para p28, 66,7% (8/12) amplificaram para o gene trp36. Para o sequenciamento e análise da diversidade genética, foram utilizadas 11 sequências do gene p28 e cinco do gene trp36. As sequências obtidas para o gene p28 apresentaram identidade variando de 99,27% a 100% quando comparadas a sequências de E. canis provenientes de diferentes regiões geográficas e, na análise da tradução de aminoácidos, foram observados sítios de mutação. A análise de rede de haplótipos baseada no gene p28 revelou nove haplótipos distintos (Hd = 0,9632). Para o gene trp36, observou-se a circulação simultânea de genótipos americanos e brasileiros na região estudada, evidenciando ampla diversidade genética e heterogeneidade local. Conclui-se que as cepas de E. canis circulantes em cães na microrregião de Unaí, Minas Gerais, apresentam diversidade genética nos genes trp36 e p28. A variação observada nas regiões de repetição em tandem e a presença de haplótipos exclusivos evidenciam fluxo gênico entre cepas. A co-circulação dos genogrupos BR e EUA reforça a complexidade genética do agente na região e destaca a importância do monitoramento molecular contínuo.

Stomoxys calcitrans (L.), conhecida popularmente como mosca-dos-estábulos, é um inseto hematófago da ordem Diptera. Sua picada causa forte dor nos hospedeiros que são principalmente bovinos e equinos, gerando quando em grandes números importante perda sanguínea e estresse que leva à perda de peso e redução na produção de carne e leite, com grande impacto econômico na atividade agropecuária. Durante o repasto sanguíneo, o inseto pode transmitir mecanicamente vários patógenos aos hospedeiros, o que gera ainda mais prejuízos. A saliva de insetos hematófagos possui diversas moléculas farmacologicamente ativas que facilitam sua alimentação, além de afetar a infecção de patógenos que transmitem por efeitos imunomoduladores em seus hospedeiros. Esse potencial imunomodulador pode afetar diferentes células do sistema imune dentre elas os macrófagos, células da imunidade inata, que possuem potencial de secreção de diversas citocinas e mediadores pró inflamatórios. O gênero Herpetomonas é um grupo monofilético, que possui integrantes em quase todos os continentes e se relaciona com um grande número de indivíduos de diferentes classes de insetos. Recentemente a espécie Herpetomonas muscarum foi isolada de S. calcitrans pela primeira vez. As leishmanioses compreendem um grupo de doenças que podem se apresentar com 4 manifestações clínicas distintas, dependendo da espécie do parasito (tegumentar cutânea, tegumentar cutânea difusa, tegumentar mucocutânea e visceral). A leishmaniose visceral também conhecida como calazar, entre outras nomenclaturas regionais, é uma doença sistêmica e crônica. No Brasil é causada pela espécie Leishmania infantum e transmitida pelos insetos vetores flebotomíneos. A LV é conhecida por acometer várias espécies de animais, como marsupiais, roedores, edentatos e canídeos, sendo o cão o principal reservatório e fonte de infecção humana em meio urbano. Diante do disposto, o presente trabalho teve como objetivo principal analisar o efeito imunomodulador do extrato da glândula salivar (EGS) de S. calcitrans em macrófagos, bem como avaliar o efeito no crescimento de formas promastigotas de L. infantum e opimastigotas de H. muscarum, avaliar a citotoxidade do extrato da glândula salivar para macrófagos, que é a célula hospedeira de L. infantum e por apresentar papel crucial na defesa inata. Foram elucidados possíveis mecanismos de ação do extrato da glândula salivar, através da produção de óxido nítrico e espécies reativas de oxigênio e na avaliação da carga parasitária dos macrófagos infectados com L. infantum na presença e ausência da saliva da mosca. Os resultados demonstraram que o extrato da glândula salivar de S. calcitrans, não tem potencial citotóxico para os macrófagos. A saliva não apresentou efeito significativo na ligação ou fagocitose em macrófagos infectados por L. infantum, sendo observado um aumento de NO e ROS em macrófagos tratados previamente com salivas estimulados ou não com IFN e LPS. Quando avaliado o efeito do extrato diretamente em promastigotas de L. infantum e opimastigotas de H. muscarum, foi observada proliferação de H. muscarum e um menor percentual de sobrevivência de L. infantum em comparação a controles não tratados com o extrato da glândula salivar. Nossos resultados mostram um importante papel da saliva de S. calcitrans com potencial farmacológico e biotecnológico na modulação do sistema imune de mamíferos e na própria biologia da mosca.

Os fungos entomopatogênicos destacam-se como alternativa sustentável no controle biológico de Rhipicephalus microplus, especialmente diante o cenário de resistência aos carrapaticidas químicos. A produção de micropartículas por gelificação iônica aplicada ao encapsulamento de propágulos surge como estratégia promissora, ao permitir a combinação de polímeros e adjuvantes capazes de proteger o fungo de fatores ambientais e prolongar sua vida útil. Os objetivos deste estudo foram desenvolver micropartículas contendo conídios de Metarhizium anisopliae s.l. CG 148 encapsulados com diferentes associações de alginato de sódio (A) com pectina (P), glicerol (G) ou quitina (Q). As micropartículas elalaboradas foram avaliadas quanto à eficiência do processo de encapsulamento, interferência da quitina na produção de conídios, distribuição de tamanho, morfologia, estrutura, tempo de prateleira, tolerância à radiação UV-B, termotolerância e eficácia no controle de R. microplus em laboratório e semi-campo. A eficiência da gelificação iônica foi determinada por meio da quantificação e análise da viabilidade dos conídios encapsulados. Para investigar o efeito da quitina nas formulações, quantificaram-se os conídios esporulados das micropartículas incubadas em meio de cultura. Formulações com quitina (AQ, APQ, AGQ e APGQ) foram utilizadas nos experimentos seguintes. Foram realizadas análises de distribuição de tamanho (ImageJ), de morfologia por microscopia (estereoscópica e eletrônica de varredura), além de espectroscopia no infravermelho (FTIR). As micropartículas fúngicas e os conídios não encapsulados (NEC) foram armazenados por um e dois meses em temperatura ambiente e sob refrigeração. Para os ensaios de tolerância, as amostras foram expostas à radiação UV-B (6,0 kJ m⁻²) e ao calor (45 °C por 4 h). Foi avaliada a eficácia das micropartículas no controle do carrapato em laboratório e semi-campo. O encapsulamento reduziu 2,5 vezes a concentração de conídios, sem comprometer sua viabilidade. As partículas AQ, APQ, AGQ e APGQ apresentaram aumento de, respectivamente, 60,26; 84,77; 37,72 e 54,84% na produção de conídios comparadas às formulações sem quitina. As micropartículas exibiram formato esférico com superfície mais homogênea (APQ e APGQ) ou heterogênea (AQ e AGQ). O diâmetro médio das micropartículas AQ, APQ, AGQ e APGQ foi igual a 1338, 1459, 1244 e 1367 µm, respectivamente. As análises de FTIR sugeriram interações físicas entre a matriz polimérica e o fungo. NEC apresentou maior geminação em relação as micropartículas em ambas condições de armazenamento. O armazenamento sob refrigeração foi mais eficiente na manutenção da viabilidade das micropartículas fúngicas comparado ao ambiente. A germinação de NEC foi reduzida após exposição à radiação UV-B (59,08%) e ao calor (0,19%) comparado à AQ (98,59% e 71,74%), APQ (95,48% e 93,87%), AGQ (94,37% e 68,18%) e APGQ (97,95% e 75,5%), respectivamente. Em laboratório, as micropartículas fúngicas reduziram os parâmetros biológicos e a sobrevivência de fêmeas ingurgitadas comparado aos controles, sem diferirem de NEC. Em semi-campo, AGQ reduziu o número de larvas em 59,5% em relação ao grupo sem tratamento, enquanto APQ foi ineficaz. Esses achados reforçam o potencial das micropartículas fúngicas como abordagem inovadora no controle desse carrapato, agregando valor tecnológico a um produto final que oferece vantagens práticas para uso em campo, como facilidade de aplicação e maior estabilidade.

O mosquito Aedes aegypti é um dos principais vetores de arboviroses de relevância para a saúde pública, como dengue, zika e chikungunya, e as limitações associadas ao uso contínuo de inseticidas químicos reforçam a necessidade de estratégias alternativas e mais sustentáveis de controle, incluindo o uso de fungos entomopatogênicos. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar a resposta de larvas de A. aegypti à infecção pelo fungo Metarhizium anisopliae, considerando tanto a modulação da resposta imune humoral quanto possíveis alterações na microbiota intestinal. Larvas da linhagem Rockefeller no estágio L2 foram expostas a suspensões conidiais do isolado M. anisopliae CG 153 na concentração de 1 × 10⁵ conídios mL⁻¹ e mantidas sob condições controladas de temperatura e umidade. No Capítulo 1, após 24 e 48 horas de exposição, intestinos, corpos gordurosos e larvas inteiras foram coletados para extração de RNA, síntese de cDNA e análise da expressão gênica por RT-qPCR, abrangendo genes associados às vias da imunidade inata Toll, IMD e JAK-STAT, bem como peptídeos antimicrobianos. No Capítulo 2, a microbiota intestinal foi analisada por sequenciamento de nova geração, seguido por etapas de filtragem, controle de qualidade e processamento dos dados. Os resultados do Capítulo 1 mostraram que a expressão dos genes avaliados apresentou variações dependentes do tecido analisado e do tempo pós-infecção, sem um padrão homogêneo entre os componentes das vias imunes, enquanto os peptídeos antimicrobianos apresentaram perfis distintos de expressão entre os tecidos e tempos avaliados. As análises de ecologia microbiana indicaram manutenção da riqueza, da diversidade e da composição global da microbiota intestinal entre os grupos controle e infectado, sem separação evidente entre os perfis microbianos nos tempos analisados. Em conjunto, os resultados indicam que a infecção larval por M. anisopliae está associada a uma resposta imune modulada de maneira dependente do tecido e do tempo, sem alterações expressivas na estrutura global da microbiota intestinal nas condições experimentais avaliadas, contribuindo para o entendimento das interações entre A. aegypti e fungos entomopatogênicos no contexto do controle biológico. 

As doenças transmitidas por vetores têm despertado crescente preocupação na medicina felina devido à sua ampla distribuição geográfica, potencial zoonótico e associação com alterações hematológicas e sistêmicas. No Brasil, estudos incluindo o gato doméstico como hospedeiro e as interações com a pulga como protagonistas são escassos, principalmente os que correlacionam os achados em ambas as espécies. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência dos patógenos em Ctenocephalides felis felis e em amostras sanguíneas de gatos infestados ou não, da Região Metropolitana do Rio de Janeiro, e relacioná-los com parâmetros clínicos e hematológicos. Foram avaliadas amostras de sangue de 400 gatos, 664 pulgas e 14 carrapatos. No presente estudo observou-se que na triagem molecular em busca de patógenos no sangue dos gatos foram detectados Mycoplasma spp. em 77 amostras (19,3%), Bartonella spp. em 26 (6,5%), Babesia spp. e R. felis, em 3 (0,75%), respectivamente, seguidos de Cytauxzoon spp. com 2 (0,5%), Ehrlichia spp. com 1 (0,25%) e nenhuma das amostras apresentou resultado positivo para Anaplasma spp. Na pesquisa direta em esfregaço sanguíneo não foram observadas estruturas sugestivas para nenhum dos agentes buscados. Nas leituras das capas leucocitárias, estruturas compatíveis com mórulas e/ou inclusões sugestivas da família Anaplasmataceae, foram observadas em 36 (9%) das lâminas, sendo dessas, apenas 14 concomitantemente positivas na qPCR para algum patógeno. Quanto as retroviroses analisadas, 81 (20,3%) foram positivas para FeLV e 14 (3,5%) para FIV, sendo 6 (1,5%) animais positivos para ambas retroviroses. A infestação por pulgas foi observada em 89 gatos, predominando infestações de baixa intensidade, com a maioria dos animais apresentando menos de 20 pulgas. Não foi observada associação estatisticamente significativa entre a presença de pulgas ou dos patógenos detectados e alterações clínicas, hematológicas ou bioquímicas. Ao analisar as pulgas, R. felis foi o microrganismo mais frequentemente detectado, com positividade de 68,7% (456/664), seguido por Bartonella spp., 12,90% (16/124), FeLV, 10,48% (13/124), Mycoplasma spp., 1,61% (2/124) e FIV, 0,81% (1/124). Nenhuma amostra apresentou detecção de Babesia spp., Cytauxzoon spp., Anaplasma spp. ou Ehrlichia spp. Os resultados indicam que, embora haja circulação de múltiplos agentes em gatos e vetores na região estudada, a baixa carga parasitária e a predominância de infecções subclínicas contribuem para a ausência de impacto clínico mensurável, ressaltando a importância da vigilância epidemiológica integrada em populações felinas urbanas.

No Brasil, Cochliomyia hominivorax é a principal espécie causadora de miíase primária em animais de produção, animais de companhia e humanos, destacando sua relevância social e econômica para a saúde única. O controle químico permanece como uma das principais estratégias de manejo, e os disruptores do crescimento de insetos (IGDs) representam alternativas promissoras devido à sua interferência no ciclo biológico do inseto. Larvas de C. hominivorax provenientes de colônia laboratorial (CEUA 8634020223) foram utilizadas para avaliar a suscetibilidade a diferentes IGDs (diflubenzuron, fluazuron, teflubenzuron, triflumuron e piriproxifen). As análises toxicológicas foram conduzidas por meio de bioensaios específicos para cada ínstar larval, considerando as características fisiológicas e comportamentais de cada fase. Os valores de CL₅₀ foram estimados por meio de análise Probit no software RStudio. Para larvas de primeiro ínstar (L1), os compostos foram incorporados à dieta larval nas concentrações de 0,001; 0,005; 0,01; 0,05; 0,1; 0,5; 1; 25; 50 e 100 µg·mL⁻¹, caracterizando bioensaio com exposição combinada por ingestão e contato. O delineamento experimental consistiu em 12 grupos, com seis repetições e dez larvas por repetição (n = 720), além de grupo controle e grupo solvente (acetona a 16% com duas gotas de Tween 80). Foram avaliadas a inibição de pupação e a inibição de emergência de adultos. Os valores de CL₅₀ para inibição da pupação, em ordem crescente, foram 0,01; 0,07; 0,15; 3,82 e 5,14 µg·mL⁻¹ para diflubenzuron, triflumuron, fluazuron, teflubenzuron e piriproxifen, respectivamente. Para inibição da emergência, os valores de CL₅₀ em ordem crescente foram 0,01; 0,03; 0,05; 0,06 e 0,10 µg·mL⁻¹, correspondendo a diflubenzuron, triflumuron, teflubenzuron, piriproxifen e fluazuron. Para larvas de terceiro ínstar (L3), na fase de pré-pupa, os bioensaios foram conduzidos exclusivamente como testes de contato. Discos de papel filtro Whatman nº 1 foram impregnados com 470 µL das soluções contendo os ativos e acondicionados em placas de Petri, em sextuplicata, nas concentrações de 5; 10; 25; 50; 75; 100; 150; 250; 500 e 1000 µg·mL⁻¹, com dez larvas por repetição (n = 720). Para o piriproxifen, também foram avaliadas as concentrações de 0,01; 0,05; 0,1 e 0,5 µg·mL⁻¹ (n = 1020), além de grupo controle e grupo solvente (acetona PA). Para inibição da emergência em L3, os valores de CL₅₀ foram 924,6 µg·mL⁻¹ para diflubenzuron, 329,5 µg·mL⁻¹ para teflubenzuron, 47,2 µg·mL⁻¹ para triflumuron e 0,4 µg·mL⁻¹ para piriproxifen. Não foi possível estimar a CL₅₀ para o fluazuron nas condições do bioensaio empregado. A integração das duas metodologias demonstra que a eficácia dos IGDs depende tanto do ínstar larval quanto da via de exposição, reforçando seu potencial estratégico no manejo integrado dessa espécie.

O presente estudo descreve a morfologia e histologia de helmintos endoparasitos de peixes marinhos das famílias Sciaenidae e Trichiuridae, coletados na CEASA-RJ, com foco em aspectos ecológicos, sanitários e taxonômicos. Foram identificadas duas espécies de trematódeos digenéticos, Lecithochirium monticelli e L. microstomum, e duas de nematoides, Anisakis spp. e Dichelyne sciaenidicola. As análises histológicas, empregando colorações como hematoxilina-eosina, orceína e tricrômico de Gomori, revelaram detalhes estruturais de tegumento, ventosas, musculatura e órgãos reprodutivos, evidenciando adaptações funcionais à fixação e sobrevivência no trato intestinal dos hospedeiros. As larvas de Anisakis spp. apresentaram características compatíveis com estágios larvais zoonóticos, enquanto D. sciaenidicola refletiu adaptações a infecções crônicas. Os resultados reforçam o valor da histologia como ferramenta diagnóstica na taxonomia parasitária, contribuindo para o entendimento da coevolução parasito-hospedeiro, para o monitoramento da saúde ambiental e para a prevenção de riscos à saúde pública associados ao consumo de pescado

Rhipicephalus microplus, comumente conhecido como carrapato do boi, é responsável por desafios econômicos e de saúde significativos, particularmente na pecuária, afetando a produtividade, aumentando os custos da fazenda e reduzindo o bem-estar animal. Acaricidas sintéticos, quando usados de forma inadequada, podem selecionar populações de carrapatos resistentes, levando à necessidade de soluções integrativas alternativas. Os micoacaricidas oferecem uma abordagem promissora no controle biológico de carrapatos. Os fungos entomopatogênicos mais estudados para o controle de carrapatos são Beauveria spp. e Metarhizium spp., enquanto as espécies Cordyceps são menos exploradas. O presente estudo teve como objetivo acessar o efeito de uma formulação de óleo de milho à base de Cordyceps javanica para controlar as fases não parasitárias do carrapato do boi em condição de semi-campo. Testes de compatibilidade foram realizados com C. javanica em diferentes concentrações de óleo de milho (1, 3 ou 5%) e óleo de silicone (0,01%), o óleo vegetal foi removido usando Solub'Oil^®, as análise de germinação foram realizadas após 24h e 48h após inoculação em BDA. Testes de laboratório foram conduzidos com formulações de C. javanica topicamente em larvas e fêmeas de R. microplus. A formulação 10⁸ conídios/mL + 3% foi selecionada para o teste em condições de semi-campo, sendo realizado três coletas para análise de persistência antes, 24h e 30 dias depois do tratamento, sendo a recuperação larval dos vasos tratados com formulação reduzida em 89% em comparação ao grupo controle aquoso. A persistência de conídios de C. javanica no solo tratado foi avaliada, um e 30 dias após o tratamento. A germinação de conídios de C. javanica com formulações de óleo em água foi superior a 98% após 24 h, as maiores concentrações de óleo não inviabilizaram o crescimento fúngico. Larvas de R. microplus tratadas em condições de laboratório com 10⁸ conídios/mL + 5% de óleo de milho e óleo de silicone apresentaram mortalidade de 95,17% cinco dias após o tratamento. Fêmeas ingurgitadas expostas às mesmas condições  apresentaram redução de 72,5% no peso da massa de ovos em comparação ao controle. Resultados semelhantes foram apresentados nas formulações com 3% de óleo de milho. Mesmo após 30 dias de tratamento, as amostras de solo dos vasos tratados com C. javanica apresentaram colônias fúngicas, evidenciando a persistência do fungo no solo. Nosso estudo apoia a integração de micoacaricidas vegetais oleosos como parte de uma estratégia de manejo integrado de pragas, oferecendo uma solução mais sustentável que reduz a dependência química na pecuária. O uso bem-sucedido de C. javanica como um agente de controle biológico pode, portanto, melhorar a saúde animal, promover a segurança alimentar e contribuir para a sustentabilidade dos sistemas de criação de gado.

Mudanças sociais e no ambiente urbano têm aproximado cães e humanos, promovendo uma relação de afeto que contribui para a longevidade dos animais. Como resultado, observa-se um aumento no diagnóstico de doenças crônicas e malignas, como o câncer. Apesar dos avanços na medicina veterinária, as doenças causadas por parasitas intestinais, ainda negligenciadas, são uma das principais causas de morbidade em cães, com sintomas como vômito, diarreia, anorexia e anemia. Cães hígidos podem ser assintomáticos, mas pacientes com câncer apresentam o sistema imunológico comprometido, seja pela doença ou pelo tratamento, favorecendo o desenvolvimento de sinais clínicos que afetam o bem-estar e podem interromper o tratamento. Embora a taxa de infecção por endoparasitos e a incidência de câncer em cães seja alta, a investigação coproparasitológica antes do tratamento ainda é pouco praticada, e não há dados na literatura sobre a ocorrência dessas infecções nesses pacientes. Este estudo teve como objetivo avaliar as endoparasitoses em cães com neoplasias e correlacioná-las com a doença oncológica (tipo citológico/histopatológico), comparando com animais livres de neoplasias e doenças imunossupressoras. Os cães foram divididos em dois grupos: grupo I (portadores de neoplasias) e grupo II (livres de neoplasias), com 80 indivíduos em cada. Para a avaliação coproparasitológica, foi solicitado aos tutores a coleta de fezes dos cães em potes com MIF durante três dias consecutivos. O material foi analisado por três métodos: centrífugo-flutuação, centrífugo-sedimentação e técnica de Faust. Os resultados dos exames e as informações clínicas obtidas das fichas de atendimento foram tabulados para análise posterior. Nos cães com câncer, foram encontrados parasitas dos gêneros Ancylostoma spp. e Trichuris spp., enquanto em cães sem neoplasias, foram observados Ancylostoma spp., Trichuris spp., Toxocara spp., Giardia sp. e Cystoisospora spp.. O grupo de pacientes com neoplasias apresentou maior número de resultados positivos nos exames coproparasitológicos, sendo os cães diagnosticados com tumores cutâneos os mais afetados. A idade dos animais positivos variou entre 4 e 14 anos, e os machos (7/26) apresentaram mais resultados positivos do que as fêmeas (4/57). O tipo histológico mais frequente nos machos positivos foi o mastocitoma (4/7), sendo que, destes, 3 apresentavam múltiplos tumores com tipos histológicos distintos. Nas fêmeas, os tumores variaram entre neoplasias mamárias, tumores ovarianos e neoplasias cutâneas, sendo que 2 apresentavam mais de um tipo histológico. Conclui-se que a investigação coproparasitológica deve ser realizada durante os exames de triagem e estadiamento de todos os cães com neoplasias, e que cães com múltiplas neoplasias parecem ser mais suscetíveis a infecções por endoparasitos.

O presente estudo objetivou avaliar a eficácia de uma formulação em pasta contendo Fluralaner no controle de D. nitens em equinos. Fluralaner é uma droga relativamente nova e pertencente à classe das isoxazolinas, que apresentam como mecanismo de ação o bloqueio de canais de cloreto controlados por ácido aminobutírico (GABA) e canais de cloreto controlados por glutamato. Essa droga foi administrada por via oral na dose de 25mg/kg de peso vivo. O estudo foi realizado através de um teste de estábulo, onde 14 equinos da raça Pônei Brasileiro foram estabulados e divididos em grupo tratado e grupo controle, animais que receberam a formulação e animais que não receberam a formulação, respectivamente. Ambos os grupos passaram por infestações periódicas nos dias -31, -29, -27, -25, -23, -21, -19, -17, -15, -13, -11, -9, -7, -5, -3, -1. Os carrapatos desprendidos naturalmente foram coletados a partir do dia –3 até o dia +29. As médias dos carrapatos desprendidos três dias pré-tratamento (-3, -2, -1) foram de 71,0±48,5 para os animais grupo controle e 81,8±66,1 para os animais do grupo tratado. Tais dados não apresentaram diferenças estatísticas significativas (p=0,831), o que demonstra que os grupos foram randomizados de forma homogênea. Comparando-se as médias dos D+1 a +29, verificou-se uma diferença significativa (p=0,024) e um tamanho de efeito alto de 1,528 (0,189 – 2,810). As médias para este período de observação foram de 36,4 (4,5-77,9) e 8,3 (3,6 – 20,1) para os grupos controle e tratado, respectivamente. Desprezando os valores obtidos para queda de carrapatos do dia +1, medida adotada em decorrência de uma eficácia carrapaticida nula neste tempo, obteve-se os seguintes valores médios de carrapatos após este tempo para o período de D+2 a D+29 de 33,9 (2,6-71,5) e 1,9 (0,9 a 4,1). Constatou-se uma diferença significativa (p<0,0001) e um tamanho de efeito grande de 2,651 (1,009 a 4,229). A eficácia carrapaticida para o período do D+1 a +29 foi de 80,2%. Quando observado os valores de queda de carrapatos do dia +1 e consequentemente a eficácia pode-se concluir que está correlacionada a eficácia 0 (zero) deste tempo. A eficácia carrapaticida para o período do D+2 a +29, desprezando o D+1, foi de 95,1%. Quando observado os valores de queda de carrapatos do dia +1 e, consequentemente a eficácia, pode-se concluir que está correlacionada à eficácia 0 (zero) deste tempo. Quanto aos resultados da ação do fluralaner observados no presente estudo para aspectos reprodutivos de D. nitens, pode ser constatar que ocorreram diferenças significativas entre os valores médios de peso de teleóginas, peso de postura e percentual de eclosão de larvas para os dois grupos experimentais.

Theileria equi é um protozoário intraeritrocítico causador da piroplasmose equina, uma doença que acomete equídeos e é responsável por gerar prejuízos à saúde e à economia do setor equestre mundialmente. No Brasil, Rhipicephalus microplus é a única espécie de carrapato com capacidade de atuar como vetor de T. equi em condições experimentais. Contudo, os mecanismos envolvidos nesta interface patógeno-vetor ainda não foram completamente esclarecidos. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão diferencial de genes envolvidos no metabolismo redox e nas principais vias de sinalização imunológica de R. microplus em resposta à infecção por T. equi. Para isso, um equino portador crônico de T. equi (controle positivo) e um equino não infectado  (controle negativo) foram infestados com larvas de R. microplus livres de patógenos. Após o período de fixação e repasto sanguíneo, larvas e ninfas inteiras foram coletadas e armazenadas individualmente, enquanto as fêmeas foram dissecadas e o intestino, ovário e glândula salivar de cada exemplar foi armazenado de forma individual. Em seguida, foi feita a extração do RNA e a síntese do cDNA de cada amostra, os quais foram submetidos ao ensaio de expressão gênica relativa através da qPCR. No primeiro capítulo, foram analisados genes relacionados ao metabolismo redox de R. microplus em resposta à infecção por T. equi. Assim,observou-se uma regulação positiva tanto de genes pró-oxidantes quanto de genes antioxidantes no intestino e na glândula salivar de fêmeas ingurgitadas infectadas por T. equi, com destaque para os genes que codificam para as enzimas dual oxidases (pró-oxidante) e catalase (antioxidante), sendo ambos mais expressos no grupo infectado. Na glândula salivar, porém, o gene que codifica para a enzima glutationa-s-transferase foi significativamente suprimido no grupo infectado, sugerindo que tal enzima pode ter papel fundamental na resposta antioxidante neste tecido. Nos estágios de larva e ninfa e no ovário de fêmeas ingurgitadas não foi observada uma resposta oxidativa significativa. No segundo capítulo, foram analisados genes envolvidos nas vias de sinalização imunológica Toll, IMD e JAK/STAT, além de genes que codificam para os peptídeos antimicrobianos microplusina, defensina e ixodidina. A infecção por T. equi estimulou a ativação das vias Toll e IMD no intestino e na glândula salivar de R. microplus, resultando em uma regulação positiva dos genes microplusina e defensina em ambos os tecidos. A via JAK/STAT, contudo, foi suprimida no intestino em resposta à infecção por T. equi, o que pode ter ocasionado a expressão diferencial não significativa do gene ixodidina observada neste tecido. Nos estágios de larva e ninfa e no ovário de fêmeas ingurgitadas não foi observada uma resposta significativa  à infecção por T. equi através das vias analisadas. Os resultados obtidos neste estudo permitem elucidar os mecanismos moleculares envolvidos na interação entre T. equi e R. microplus, contribuindo para uma melhor compreensão acerca de como o carrapato responde à infecção pelo protozoário. Tais informações auxiliam na identificação de moléculas-chave com potencial para serem utilizadas no desenvolvimento de novas estratégias de prevenção e controle da piroplasmose equina no país.

As enfermidades causadas por hemoprotozoários representam um importante desafio à pecuária brasileira, tanto pela dificuldade no diagnóstico quanto pelos prejuízos econômicos decorrentes da redução da produtividade dos rebanhos. Entre esses agentes, destacam-se os protozoários do gênero Trypanosoma, responsáveis pela tripanossomose, uma doença que pode se manifestar com sinais clínicos inespecíficos, como anemia, perda de peso, diminuição na produção de leite e abortos. Essas características clínicas favorecem o subdiagnóstico e a subnotificação da enfermidade nos rebanhos. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de Trypanosoma spp. em bovinos de diferentes municípios do estado do Rio de Janeiro, utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) como principal ferramenta diagnóstica. Foram analisadas 398 amostras sanguíneas de bovinos provenientes de propriedades rurais localizadas nos municípios de Vassouras, Miguel Pereira, Seropédica, Teresópolis, Piraí e Volta Redonda, entre 2022 e 2025. As amostras foram submetidas à PCR utilizando primers específicos para os genes 18S rDNA e Catepsina L (CatL), marcadores amplamente empregados na triagem e diferenciação de espécies do gênero Trypanosoma. Dos animais avaliados, 13 amostras (3,27%) foram positivas para Trypanosoma spp., todas oriundas de uma única propriedade no município de Volta Redonda. O sequenciamento genético das amostras confirmou a presença de Trypanosoma vivax, com 100% de similaridade em relação a cepas previamente descritas no Brasil e na África Ocidental. A análise filogenética demonstrou que as sequências obtidas se agruparam com linhagens já circulantes na região Sudeste do país. Os achados reforçam a importância do uso da PCR como método sensível e específico para a detecção de tripanossomose bovina, especialmente em infecções subclínicas ou de baixa parasitemia, nas quais os métodos convencionais apresentam baixa eficiência. O estudo destaca ainda a relevância do monitoramento epidemiológico com base em ferramentas moleculares, contribuindo para o diagnóstico precoce, o controle sanitário e a prevenção da disseminação da doença nos rebanhos do estado do Rio de Janeiro.

A anaplasmose bovina, causada por Anaplasma marginale, é uma hemoparasitose de grande importância econômica e sanitária na pecuária mundial, transmitida principalmente pelo carrapato Rhipicephalus microplus. A doença apresenta grande diversidade genética, refletida principalmente nas proteínas de superfície MSP1a e MSP4, que influenciam tanto a variabilidade antigênica quanto a capacidade de evasão imunológica do patógeno. Este estudo objetivou avaliar a prevalência e a diversidade genética de A. marginale em bovinos de propriedades convencionais e orgânicas no estado do Rio de Janeiro. A análise das propriedades buscou analisar se manejo sanitário inadequado, alta densidade de vetores e ausência de acompanhamento veterinário contribuem para a manutenção e disseminação da doença. Foram coletadas 388 amostras de sangue em sete municípios, com posterior extração de DNA, amplificação molecular dos genes GAPDH, msp4 e msp1α, e análise das repetições em tandem de msp1α. Os resultados mostraram uma prevalência de 66,8% de Anaplasma spp. nas amostras analisadas, com identificação de oito cepas circulantes. Observou-se predominância do genótipo E, com uma variação E1, evidenciando a diversidade genética do patógeno na região. Em relação ao manejo sanitário, o percentual de positividade não diferiu estatisticamente. Os resultados destacam a necessidade de adotar estratégias integradas de manejo e controle, envolvendo vigilância epidemiológica contínua e ações eficientes de controle de vetores, para reduzir a prevalência da anaplasmose e minimizar seus impactos nos rebanhos bovinos.

Cães e gatos desempenham papel fundamental na sociedade atual, sendo considerados membros das famílias e importantes companheiros dos seres humanos. Esses animais podem abrigar uma ampla variedade de agentes transmitidos por vetores, entre os quais se destacam os protozoários sanguíneos conhecidos como hematozoários, pertencentes aos gêneros Babesia, Theileria, Hepatozoon e Rangelia. Esses parasitos integram o filo Apicomplexa, que abriga organismos de grande relevância veterinária e, em alguns casos, zoonótica. Este estudo teve como objetivo analisar amostras de sangue e lâminas de esfregaço sanguíneo de 338 animais, entre cães e gatos, atendidos no Hospital Veterinário de Pequenos Animais da Universidade Federal do Rio de Janeiro. As amostras foram encaminhadas ao Laboratório de Patologia Clínica Veterinária (LABVET) para processamento hematológico e citológico e em seguinda, ao Laboratório de Hemoparasitos e Vetores (LHV), onde foram realizadas a extração de DNA, análises citológicas e moleculares. Os esfregaços sanguíneos foramcorados pelo método de Giemsa (1:10) e avaliados em microscopia óptica de imersão (1000x) perfazendo 100 campos microscópicos. Não foram observadas formas compatíveis com hematozoários nas amostras analisadas. Na análise molecular, a qPCR visando a amplificação do gene hsp70 de Babesia vogeli detectou 1,8% (n=6/338) de positividade (cinco cães e um gato), enquanto a nested-PCR, direcionada a um fragmento do gene 18S rRNA, revelou 0,6% (2/338) de amostras positivas para piroplasmas. Para Hepatozoon spp., observou-se 1,8% (n=6/338) de positivos pela PCR convencional. Duas amostras de Piroplasma sequenciadas apresentaram mais de 99% de identidade com Babesia vogeli e seis amostras que amplificaram Hepatozoon tiveram mais de 99% de identidade com outras sequências de H. canis depositadas no Genbank. A concordância entre os métodos aplicados para o diagnóstico de B. vogeli foi avaliada pelos testes de McNemar e Kappa: o primeiro não indicou diferença significativa entre as técnicas (p = 0,125), enquanto o coeficiente Kappa demonstrou concordância moderada (0,496; p < 0,001), com discordâncias concentradas em amostras positivas apenas pela qPCR, reforçando sua maior sensibilidade diagnóstica. As avaliações hematológicas mostraram anemia, trombocitopenia, hiperproteinemia e até hemogramas sem alterações em animais positivos para B. vogeli, além de leucocitose, anemia, hiperproteinemia e leucopenia em positivos para H. canis. Conclui-se que a detecção de hematozoários foi baixa na população de cães e gatos amostradas no HVPA e que os métodos moleculares apresentaram maior sensibilidade diagnóstica do que a citologia, sobretudo em infecções de baixa carga parasitária. Além disso, observou-se que a qPCR foi significativamente mais sensível que a nested-PCR para o diagnóstico molecular de B. vogeli. Os achados reforçam a importância da aplicação de técnicas mais sensíveis de diagnóstico e evidenciam a necessidade de estudos adicionais para aprofundar a compreensão desses agentes na rotina hospitalar, especialmente em felinos, cujos hematozoários são pouco estudados.

O controle de artrópodes vetores e pragas agrícolas requer alternativas sustentáveis, considerando as limitações e os impactos associados a acaricidas e inseticidas químicos. Nesse contexto, fungos entomopatogênicos são elementos-chave tanto na formação das respostas imunes do hospedeiro quanto como parte de estratégias de manejo integrado. Esta tese investigou dois modelos distintos: (i) o carrapato bovino Rhipicephalus microplus, com foco na interação de Metarhizium anisopliae com a bacteriota intestinal na presença ou ausência de Anaplasma marginale, e (ii) a mariposa Noctua pronuba, uma importante praga agrícola, com ênfase em suas interações imunes humorais com Beauveria bassiana e Trichoderma atroviride. No Capítulo I, a diversidade bacteriana intestinal de fêmeas ingurgitadas de R. microplus foi caracterizada por meio de uma abordagem de metabarcodificação visando a região V3–V4 do gene 16S rRNA bacteriano em grupos expostos ou não a M. anisopliae e infectados com A. marginale. A coinfecção remodelou a bacteriota, com um maior número de táxons associados e uma composição microbiana distinta em comparação aos grupos controle e infectados individualmente. A análise da rede de coocorrência revelou que o microbioma coinfectado (Metarhizium e Anaplasma) exibiu maior conectividade e robustez, sugerindo uma resposta compensatória do hospedeiro e da comunidade bacteriana ao estresse duplo, em vez de estabilidade benéfica. A predição funcional indicou que essas mudanças podem representar uma adaptação metabólica do consórcio bacteriano para sustentar a sobrevivência de carrapatos e/ou patógenos, apoiada pela maior abundância de genes funcionais associados a vias metabólicas no grupo coinfectado. Essas descobertas destacam o papel modulador da bacteriota intestinal na interface fungo-vetor-patógeno, com implicações diretas para a competência vetorial de R. microplus, e reforçam o potencial dos fungos para interferir nos ciclos de transmissão de patógenos. No Capítulo II, a resposta imune de larvas de N. pronuba foi investigada após exposição a B. bassiana (entomopatogênica) e T. atroviride (não entomopatogênica). A expressão diferencial de genes relacionados à imunidade inata (cecropina 1, atacina e PGRP-A) foi quantificada por qPCR. B. bassiana induziu uma ativação precoce mais forte de atacina e PGRP-A seis horas após o tratamento, enquanto T. atroviride promoveu a supressão de atacina e PGRP-A em 12 e 24 horas, sugerindo uma capacidade de interagir com as vias imunes do hospedeiro, apesar da ausência de patogenicidade evidente. Esses resultados expandem nossa compreensão dos mecanismos de reconhecimento e defesa contra fungos e ressaltam a importância de explorar novos isolados fúngicos, como Trichoderma, em programas de biocontrole. Os dois capítulos demonstram que as respostas imunes dos artrópodes e a dinâmica das bacteriomas intestinais são determinantes centrais na interação com fungos e patógenos entomopatogênicos. A compreensão dessas relações fornece uma base para o desenvolvimento de estratégias inovadoras de biocontrole capazes de reduzir a dependência de insumos químicos e contribuir para a sustentabilidade na saúde animal e na agricultura.

A produção avícola é uma das atividades agrícolas mais importantes para a economia brasileira, tendo registrado um crescimento expressivo na última década. Em 2024, o Brasil produziu cerca de 14,972 milhões de toneladas de carne de frango, sendo considerado o 2º maior produtor mundial e líder mundial das exportações neste setor. Durante o processo de produção de carne aviária, é fundamental considerar que o consumo de água varia entre 5.000 e 21.000 litros por tonelada de carne, gerando grandes volumes de efluentes ao longo da cadeia de abate. Além disso, a avicultura produz grande quantidade de resíduos, incluindo carcaças de aves mortas e cama de frango que consiste na mistura de excretas, penas e descamações da pele das aves e restos de alimento que pode impactar a água de diversas maneiras, desde o gasto excessivo desse recurso até a infiltração dos resíduos no solo e contaminação das águas subterrâneas e superficiais. O uso de antimicrobianos na produção animal tornou-se frequente como promotores de crescimento, pois auxiliam no controle de patógenos e no desempenho animal, geralmente em doses contínuas, visando evitar a condenação de carcaças e queda na produtividade. Mesmo apresentando eficiência, há uma pressão pela sua substituição, em decorrência da alta resistência bacteriana. Nesse contexto, a água torna-se uma via de disseminação de bactérias multirresistentes, o que pode aumentar o risco de transmissão entre os animais, o meio ambiente e, até mesmo, os seres humanos. Dentre as várias classes de antimicrobianos, as polimixinas foram amplamente utilizadas na medicina veterinária para o controle de processos infecciosos e como promotoras de crescimento em animais de produção. A resistência às polimixinas era associada apenas a alterações regulatórias e mutações em genes cromossômicos. No entanto, em 2015, o primeiro gene de resistência móvel (mcr-1) foi identificado em um plasmídeo de Escherichia coli na China. A presença de resistência a polimixina E (colistina) em elementos genéticos móveis representa um risco significativo para a saúde humana, uma vez que esses elementos são capazes de disseminar rapidamente por meio da transferência horizontal de genes (THG). A presença do gene mcr-1 em pelo menos cinco continentes está bem documentada, mas ainda há pouco conhecimento sobre sua origem, aquisição, surgimento e os mecanismos de propagação. O presente estudo tem como objetivo caracterizar Enterobacterales resistentes às polimixinas em águas residuais da Estação de Tratamento de um abatedouro avícola no município de São José do Vale do Rio Preto, localizado na região Serrana do Estado do Rio de Janeiro. Foram coletadas 16 amostras de água em diferentes pontos ao longo do fluxo de tratamento. Ao todo, 140 cepas de Enterobacterales foram isoladas e identificadas por espectrometria de massas - MALDI-TOF MS. As cepas foram submetidas à determinação da concentração inibitória mínima (CIM) de colistina por microdiluição em caldo, sendo 39 classificadas como resistentes (CIM > 2 µg/mL). Estas foram então triadas quanto à presença dos genes mcr-1 a mcr-10, por meio de PCR convencional. Dezesseis cepas apresentaram pelo menos um dos genes pesquisados, com destaque para a detecção dos genes mcr-1 em cepas de E. coli, Enterobacter sp. e Klebsiella sp. nos três pontos amostrados, e do gene mcr-10 em Enterobacter bugandensis. As cepas positivas foram submetidas à tipagem clonal por Multilocus Sequence Typing (MLST). Adicionalmente, as cepas de E. coli foram analisadas quanto à classificação filogenética pelo método de Clermont. Por fim, isolados de Enterobacter bugandensis e Klebsiella pneumoniae obtidos do efluente tratado foram selecionados para sequenciamento genômico completo. A identificação de genes mcr em diferentes espécies de Enterobacterales ao longo da cadeia de tratamento evidencia o papel das águas residuais de abatedouros como reservatórios e potenciais fontes de disseminação de resistência às polimixinas. A detecção desses genes, inclusive após o processo de tratamento, reforça a necessidade de vigilância contínua e do aprimoramento das estratégias de biosseguridade. O presente estudo contribui para o entendimento da dinâmica da resistência em ambientes relacionados à produção animal, além de fornecer subsídios para políticas públicas que visem mitigar os riscos associados à propagação de genes de resistência, especialmente sob a perspectiva de Uma Só Saúde.

Os protozoários do Filo Apicomplexa são parasitos obrigatórios encontrados em uma gama de hospedeiros vertebrados e invertebrados hematófagos, apresentando ciclo de vida monoxeno ou heteroxeno, a depender do parasito, para seu completo desenvolvimento. Pertencentes à subordem Adeleorina, os apicomplexos do gênero Hepatozoon tiveram seus primeiros registros parasitando pequenos mamíferos (roedores e marsupiais) no Brasil no século passado. Em 1915 foi detectado Hepatozoon muris em roedor Akodon fuliginosus em São Paulo, e em 1916 outra espécie do parasito foi descrita, como Haemogregarina didelphydis em marsupiais da espécie Didelphis aurita no município do Rio de Janeiro, localizado no estado do Rio de Janeiro. Mais recentemente, uma nova espécie denominada Hepatozoon milleri foi descrita em roedor Akodon montensis no município de Botucatu, em São Paulo, utilizando, além da microscopia óptica, análises moleculares. No presente estudo, amostras de fígado e esfregaços sanguíneos foram obtidos de 309 pequenos mamíferos não voadores capturados em municípios dos estados do Paraná (Cruz Machado, Lidianópolis e Ponta Grossa) e Rio de Janeiro (Iguaba Grande e Nova Friburgo), sendo três espécies de marsupiais didelfídeos (Didelphis aurita, Monodelphis americana e Philander quica), 14 espécies de roedores silvestres da família Cricetidae (Akodon cursor, Akodon montensis, Akodon paranaensis, Delomys sublineatus, Euryoryzomys russatus, Juliomys ossitenuis, Necromys lasiurus, Nectomys squamipes, Oligoryzomys flavescens, Oligoryzomys nigripes, Oxymycterus nasutus, Oxymycterus quaestor, Sooretamys angouya e Thaptomys nigrita) e duas espécies de roedores sinantrópicos da família Muridae (Mus musculus e Rattus rattus). Os esfregaços foram corados pelo método de Giemsa e os gametócitos detectados através de microscopia óptica em 10% (31/309) dos pequenos mamíferos analisados (Akodon cursor, Akodon montensis e Oligoryzomys nigripes). Diferenças morfométricas significativas foram observadas em medidas de gametócitos de roedores do gênero Akodon. Utilizando PCR convencional, foram amplificados fragmentos de 18S rDNA de Hepatozoon spp. em 23,3% (72/309) de roedores (A. cursor, A. montensis, O. nigripes, Oxymycterus nasutus, Oxymycterus quaestor, Sooretamys angouya e Mus musculus). Não foi detectada infecção por Hepatozoon spp. nos marsupiais analisados neste estudo. As análises filogenéticas demonstraram que as sequências obtidas de roedores neste estudo (n = 41) se agruparam em um subclado com outras sequências de pequenos mamíferos do Brasil e pertencem a quatro diferentes haplótipos. Posteriormente, três sequências longas (>1600 pb) representativas dos haplótipos 1, 3 e 4 foram obtidas e analisadas. Com base na análise filogenética, este estudo reforça a relação trófica entre roedores e répteis como um possível ciclo de transmissão de Hepatozoon na América do Sul. Além disso, nossas descobertas expandem o conhecimento sobre os hospedeiros de Hepatozoon spp., descrevendo Oxymycterus nasutus e Oxymycterus quaestor como novas espécies hospedeiras e identificando dois novos haplótipos circulantes em roedores do estado do Paraná, onde o parasito ainda não havia sido detectado em animais desta ordem. Após o exame de qualificação, o estudo foi ampliado com a inclusão de novas amostras de roedores e marsupiais que também se revelaram positivas para Hepatozoon. Além disso, realizou-se a investigação da presença de piroplasmas nessas populações, constatando-se positividade em ambos os grupos de hospedeiros, o que enriquece significativamente a compreensão da diversidade parasitária que circula entre esses animais.

Espécies do gênero Rickettsia apresentam ampla distribuição no Brasil, incluindo Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia bellii, Rickettsia felis e Rickettsia amblyommatis, sendo R. rickettsii a principal causadora da febre maculosa brasileira. Apesar da reconhecida importância dos carrapatos na manutenção desses agentes, ainda são escassos estudos comparativos envolvendo diferentes biomas. Este estudo teve como objetivo investigar a diversidade de carrapatos e a ocorrência de Rickettsia spp. em carrapatos de vida livre e oriundos de hospedeiros silvestres nos biomas Amazônia, Mata Atlântica e Cerrado. Foram analisados 460 carrapatos, com predomínio do gênero Amblyomma (99,7%), oriundos da Amazônia (n = 303), Cerrado (n = 64) e Mata Atlântica (n = 93). As amostras foram identificadas morfologicamente e submetidas à detecção molecular de Rickettsia spp. por PCR convencional direcionada aos genes gltA, htrA (17 kDa) e ompA, seguida de sequenciamento e análise filogenética. Do total analisado, 9,22% das amostras foram positivas para Rickettsia spp., com detecção restrita aos biomas Amazônia e Mata Atlântica. As espécies associadas às amostras positivas foram Amblyomma cajennense sensu stricto, Amblyomma sculptum, Amblyomma dubitatum, Amblyomma ovale, Amblyomma geayi e Ixodes loricatus. Na Amazônia, A. cajennense s.s. e A. geayi foram detectados em Tapirus terrestris, Bradypus variegatus e no ambiente, evidenciando elevada plasticidade ecológica. Na Mata Atlântica, A. sculptum e A. dubitatum parasitando Hydrochoerus hydrochaeris apresentaram elevada positividade, reforçando o papel da capivara como hospedeiro amplificador nos ciclos enzoóticos. Não houve detecção de Rickettsia spp. no Cerrado. As ninfas positivas estavam predominantemente infectadas por R. amblyommatis, além da detecção pontual de R. felis em uma ninfa de A. sculptum. Não foi detectado DNA de R. rickettsii no conjunto amostral, embora tenham sido identificadas riquétsias pertencentes ao grupo da febre maculosa, como R. parkeri e R. amblyommatis. Os resultados demonstram que a circulação de riquétsias varia entre os biomas, refletindo diferenças ecológicas, vetoriais e de hospedeiros. O estudo reforça a importância dos carrapatos na manutenção de ciclos enzoóticos e destaca a necessidade de vigilância integrada em áreas de interface entre humanos, animais e ambiente, sob a perspectiva de Uma Só Saúde.

Dentre os principais ectoparasitas de importância em animais de companhia, destaca-se as moscas Cochliomyia hominivorax. Diversas classes de inseticidas são utilizados para o manejo das infestações. O fipronil é um inseticida pertencente à classe dos fenilpirazóis, utilizado na medicina veterinária pela via tópica. Devido à dados de exposição humana ao FIP utilizado a partir dessa via de administração, somado à tendência no mercado veterinário no desenvolvimento de ectoparasiticidas por via oral, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma formulação sob a forma farmacêutica de tabletes mastigáveis contendo fipronil, com avaliação da farmacocinética descritiva do tratamento por via oral e eficácia em cães naturalmente infestados por larvas de C. hominivorax. Os tabletes foram desenvolvidos por moldagem, seguindo as etapas de preparo do diluente, aglutinante, mistura dos componentes e incorporação do ativo. O estudo farmacocinético foi realizado após a administração oral de uma unidade de tablete mastigável de fipronil a 72mg, correspondente à 6mg/kg. O estudo de eficácia foi conduzido através da administração por via oral de uma unidade de tablete mastigável de fipronil a 72mg, conforme a ocorrência natural de cães infestados por C. hominivorax. A caracterização dos tabletes foram aceitáveis em relação aos critérios de controle de qualidade, com peso médio, doseamento e uniformidade de dose dentro dos limites aceitáveis. Quando administrado por via oral, foi absorvido e atingiu a concentração sistêmica rapidamente, com Cmax de 3126,53 ng/mL em 2,22h (Tmax). O estudo de eficácia clínica in vivo com o tratamento de uma unidade do tablete mastigável de fiprinil a 72mg promoveu a eliminação de 97,76% das larvas C. hominivorax após 24h de tratamento, com eficácia global de 100% em cães infestados naturalmente.

O estudo envolvendo hemoparasitos de aves silvestres e exóticas, sob cuidados humanos e de vida livre, auxilia diretamente na conservação de animais ex situ e in situ, através da manutenção da saúde dos animais que são mantidos em instituições e de animais que sofreram ações antrópicas, visto que o Brasil alberga uma das maiores biodiversidades do planeta. Estudos para determinação de ocorrência e diversidade desses parasitos, podem esclarecer a relação parasito-hospedeiro e as condições físicas que as aves se encontram ao albergar o agente. Posto isso, o objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência citológica e molecular de hemoparasitos em aves recebidas por Centro de Reabilitação de Animais Silvestres, pelo criadouro comercial e por Parque de Educação Ambiental, todos situados na zona oeste do estado do Rio de Janeiro. Foram colhidos sangue total de 104 aves, divididas em 55 aves de vida livre e 49 aves mantidas sob cuidados humanos. A partir disso, esfregaços sanguíneos foram confeccionados e análises moleculares realizadas para agentes dos gêneros Borrelia e Ehrlichia, família Trypanosomatidae e das ordens Haemosporida e Piroplasmida. A positividade de hemoparasitos nos indivíduos estudados foi de 13,46% (n=14/104) através da técnica molecular, sendo agentes das ordens Haemosporida (11,54%; n=12/104), Piroplasmida (0,96%; n=1/104) e para família Trypanosomatidae (0,96%; n=1/104). Na técnica de esfregaço sanguíneo foi possível observar a presença de formas tripomastigotas em amostra compatível com diagnóstico molecular com alvo no gene 24Sα-rDNA em amostra obtida de Asio clamator. Foram identificados merozoítos sugestivos de Piroplasmida encontrados em esfregaço sanguíneo e confirmados por meio de PCR com alvo no gene 18S rDNA em Sula leucogaster de vida livre. Com a realização do sequenciamento, o agente de Asio clamator teve 91,60% de similaridade ao gene 24Sα-rDNA de Trypanosoma theileri, e duas amostras com similaridade de 99,57% ao fragmento do gene cytB de Haemoproteus (Haemoproteus) paramultipigmentatus em espécimes de Columbina talpacoti sob condições de resgate. Além disso, observou-se também Plasmodium sp., com identidade de 99,9% com o fragmento do gene cytB, em um espécime de Ramphastos toco também sob proveniente de vida livre. Plasmodium juxtanucleare foi encontrado com similaridade (99% a 100%) a outras sequencias depositadas no GenBank em seis indivíduos de Gallus gallus domesticus, bem como P. juxtanucleare em um indivíduo de Ara ararauna, todos sob condições de cativeiro. Outro achado confirmado após sequenciamento, foi P. juxtanucleare em um indivíduo de Rupornis magnirostris de vida livre com 99,57% de similaridade com sequência do gene cytB depositado no GenBank. Estudos envolvendo a frequência de hemoparasitos em aves, auxilia na criação de protocolos de medicina preventiva e de ações de quarentena para animais que serão mantidos sob cuidados humanos ou que serão reintroduzidos em natureza, reforçando a necessidade do conhecimento do agente e do seu hospedeiro.

Aedes (Stegomyia) aegypti está envolvido na disseminação de diversos arbovírus, representando um desafio para a Saúde Pública. Diante da crescente resistência aos inseticidas químicos e das preocupações com contaminação ambiental, torna-se crucial explorar abordagens de controle mais sustentáveis. O objetivo deste estudo foi avaliar a persistência de Metarhizium anisopliae CG 153 sobre larvas de A. aegypti em condições de semicampo, ao longo de 3 semanas a partir da introdução semanal de um novo lote de larvas e o impacto sobre a geração descendente, por meio da adaptação das orientações da Organização Mundial da Saúde para testes laboratoriais e de campo de larvicidas para mosquitos. Conídios foram extraídos de meio de arroz e suspensões ajustadas a 1×10⁶ e 1×10⁸ conídios/mL. Cincos tipos de recipientes, de diferentes tamanhos e formas, foram utilizados para simular os criadouros artificiais, e cada tipo (N=6), continha de 100 a 400 mL de suspensão conidial ou Tween 80 a 0,03%, com 25 a 100 larvas (L2). A sobrevivência das larvas foi avaliada diariamente durante 7 dias, e a introdução de um novo lote de larvas realizada a cada 7 dias. A persistência da virulência foi avaliada durante 21 dias e uma alíquota de 10 μl das suspensões foi retirada dos criadouros a cada 7 dias para monitoramento da viabilidade dos conídios e reisolamento. As larvas mortas foram removidas semanalmente e direcionadas para reisolamento fúngico e microscopia eletrônica de varredura. As larvas sobreviventes foram retiradas ao final de 7 dias e as pupas transferidas para gaiolas, onde os adultos emergiram e receberam alimentação com solução açucarada 10% e sangue para oviposição. Os ovos foram quantificados, as larvas descendentes contabilizadas, e sua sobrevivência avaliada diariamente por 7 dias. Temperatura e umidade relativa foram monitoradas diariamente. A concentração 1×10⁸ conídios/mL foi a mais virulenta durante as três semanas, reduzindo quase 100% da sobrevivência das larvas em todos os tipos de criadouros: vaso grande, a redução da sobrevivência das larvas foi observada na primeira (χ2= 552,5; P<0,0001), segunda (χ2= 462,4; P<0,0001) e terceira semanas (χ2= 313,5; P<0,0001); vaso de barro, redução significativa na primeira semana (χ2= 609; P<0,0001), pois as suspensões conidiais e solução Tween 0,03 % evaporaram; vaso pequeno, redução na sobrevivência das larvas na primeira (χ2= 263,8; P<0,0001), segunda (χ2= 496,8; P<0,0001) e terceira semanas (χ2= 407,5; P<0,0001); os criadouros prato floreira e prato pequeno foram acompanhados por duas semanas pois as suspensões/soluções evaporaram. Em ambos, foram observadas diferenças estatísticas na primeira (χ2= 1.362; χ2= 350,9; P<0,0001) e segunda (χ2= 540,7; χ2= 432,8; P<0,0001) semanas, respectivamente. A viabilidade média das suspensões conidiais diminuiu ao longo das semanas. O reisolamento fúngico nas larvas tratadas apresentou colônias esverdeadas, características de M. anisopliae. À microscopia eletrônica foi possível observar conídios de M. anisopliae na cutícula/aberturas naturais das larvas. Portanto, M. anisopliae CG 153 foi capaz de persistir em criadouros artificiais e manter sua virulência sobre larvas de A. aegypti em condições de semicampo durante 21 dias, demonstrando potencial para bioprospecção e utilização no controle biológico a campo de larvas de A. aegypti.

Os helmintos representam um grande problema de saúde pública para os pets e animais de produção levando a prejuízos econômicos no setor agrícola e risco de zoonoses aos seus responsáveis. Extratos vegetais e seus componentes podem ser uma alternativa eficiente como anti-helmínticos. O objetivo deste estudo foi caracterizar química e biologicamente o extrato aquoso de Eleusine indica e avaliar sua capacidade antioxidante e sua ação anti-helmíntica frente ao nematoide Caenorhabditis elegans. Para atender este objetivo, o extrato foi caracterizado em seus componentes fenólicos por testes antioxidantes e quantitativos e sua atividade frente ao nematídeo adulto foi realizada utilizando concentrações de 50 a 1500 μg/mL-1, em quintuplicata, incubadas por 48h. Foi obtido extrato aquoso a 10% (p/v) de E. Indica, após análise o produto apresentou 5,50 mg de quercetina/g de extrato seco de flavonoides e 8,15 mg de quercetina/g de extrato seco para fenólicos. Quando investigado os valores dos antioxidantes totais, o extrato vegetal obteve o valor de 63,71 mmol Fe(II)/100 mg de extrato seco. Sua atividade nematicida indicou CL50 e CL90 de 725,6 e 12926,0 μg/mL-1. respectivamente. Isto posto, o extrato de Eleusine indica apresentou efeito nematicida no modelo animal proposto tendo sua capacidade antioxidante avaliada.

A bovinocultura leiteira representa uma das principais fontes de renda e geração de empregos do setor agropecuário brasileiro, sendo marcada por acentuada heterogeneidade tanto em relação aos sistemas de produção quanto ao perfil dos rebanhos e de produtores. O status sanitário de um rebanho leiteiro é essencial dentro da cadeia de produção, em que a maior dificuldade enfrentada pelos produtores é a mastite. Sua etiologia é atribuída tanto a agentes ambientais quanto contagiosos, sendo as bactérias do gênero Staphylococcus a causa mais comum entre todos os casos e amplamente distribuída pelo mundo. O setor de produção animal se torna crucial na propagação tanto de patógenos quanto de genes de resistência, sendo a administração de antimicrobianos como promotores de crescimento e profiláticos a principal via de pressão seletiva sobre a microbiota animal e ambiental. Considerando-se o significativo risco mediante quadros infecciosos e os embargos econômicos implicados, a OMS declarou a resistência antimicrobiana uma ameaça substancial a saúde global. O objetivo deste trabalho foi avaliar a prevalência de espécies do gênero Staphylococcus e o perfil fenogenotípico de resistência antimicrobiana frente a classe dos beta-lactâmicos mediada pelos genes mecA e blaZ a partir isolados obtidos de amostras de leite bovino coletado em propriedades do sul do estado de Rondônia e da Baixada Fluminense, bem como o perfil higiênico-sanitário e socioeconômico dos produtores. A amostragem abrangeu 127 amostra de leite, as quais foram submetidas a identificação fenotípica a nível de gênero em AMVF, teste de coagulase em tubo e resistência a bacitracina 0,04UI, e identificação proteômica a nível de espécie pela técnica de MALDI-TOF. A caracterização do perfil de resistência fenotípica foi realizada pela técnica de difusão em disco dada pela cefoxitina, oxacilina e penicilina, e a detecção dos genes mecA e blaZ através de PCR. O levantamento do perfil higiênico-sanitário e socioeconômico das propriedades foi feito pela aplicação de questionário durante a coleta das amostras. Os resultados obtidos demonstraram prevalência de aproximadamente 58% de S. aureus, frente a cerca de 42% de espécies de ECN. A resistência antimicrobiana fenotípica foi observada apenas em 35% dos isolados resistentes a penicilina, sendo que destes aproximadamente 43% foram provenientes da região Norte e 57% da região Sudeste. Dentre estes, foi confirmada a presença do gene mecA em cerca de 20% dos isolados, apresentando prevalência de 15% e 25% para as regiões Norte e Sudeste, respectivamente; e blaZ em 7% dos isolados, sendo estes obtidos somente a partir de amostras da região Sudeste. Os resultados obtidos proporcionaram a comparação do perfil de resistência dos isolados e perfil higiênico-sanitário e socioeconômico e das propriedades incluídas no estudo. Desta forma, fica evidente a necessidade de abordagens direcionadas a atender as particularidades de cada região, sendo indispensáveis estudos mais profundos acerca do tema.

Stomoxys calcitrans é um díptero hematófago conhecido como “mosca-dos-estábulos”. O presente estudo objetivou determinar sob quais pressões os nematoides entomopatogênicos (NEPs) mantém sua viabilidade e capacidade de infectar e matar as larvas de S. calcitrans em subprodutos da indústria sucroalcooleira. Para se obter as pressões desejadas, utilizou-se uma bomba hidráulica com controlador de pressão e um bico de aspersão para reproduzir as pressões utilizadas na fertirrigação dos canaviais. Grupos de 10 larvas de terceiro instar da mosca foram depositados em recipientes plásticos contendo duas folhas de papel de filtro e diferentes subprodutos de cana (de acordo com cada grupo). Utilizou-se os Juvenis infectantes (JIs) de Heterorhabditis bacteriophora HP88, H. baujardi LPP7 e H. indica LPP30 já submetidos às pressões de 60, 70 e 80 psi. O volume total foi de quatro mL de água destilada por tratamento (nos bioensaios com água) e quatro mL de vinhoto 50% (nos bioensaios com vinhoto), a concentração de NEPs utilizada em todos os bioensaios foi de 200 JIs/larva da mosca. O grupo controle teve a mesma concentração de JIs, porém sem ter passado pelo sistema de pressão. Também houve um grupo controle sem a presença de NEPs. A mortalidade larvar foi observada diariamente. Os bioensaios foram mantidos em 27±1° C e 70±10% UR, com seis repetições. Os dados foram submetidos aos testes de normalidade de Shapiro-Wilk e de homocedasticidade de Bartlett. Quando observados os pressupostos, aplicou-se a análise de variância, seguido do teste de Tukey (p<0,05) para comparação das médias. Identificou-se que independentemente do substrato utilizado, os nematoides, submetidos ou não a diferentes pressões, impactaram na mortalidade larvar S. calcitrans. No bioensaio em água destilada sem a presença de subprodutos de cana, as espécies H. bacteriophora HP88 e H. indica LPP30 foram as mais virulentas às larvas de S. calcitrans, com médias de mortalidade superiores a 85%. As pressões aparentemente não afetaram a virulência dos NEPs, pois a mortalidade nos grupos tratados com pressão foi superior ao grupo controle. Em torta de filtro, as espécies H. bacteriophora HP88 e H. indica LPP30 não tiveram sua virulência afetada pelas pressões utilizadas, já H. baujardi LPP7 apresentou queda na eficiência após submetido a 60, 70 e 80 psi. Em bagaço de cana, apenas as médias de mortalidade ocasionadas pelos NEPs foram variantes entre si, sendo o H. bacteriophora HP88 (81,7%) o mais virulento. Identificou-se que as pressões avaliadas não diminuíram a virulência dos NEPs, os quais, após submetidos a 60, 70 e 80 psi, mantiveram seu efeito nocivo às larvas da mosca, com média de mortalidade superior a 70%. Em palha de cana, H. bacteriophora HP88 teve uma ligeira redução de sua virulência quando submetido a 80 psi, causando mortalidade larvar de S. calcitrans de 72%, no entanto, até 70 psi, essa espécie promoveu a mortalidade das larvas da mosca em níveis superiores a 85%. Nas espécies H. indica LPP30 e H. baujardi LPP7, a aplicação das pressões (60,70 e 80 psi) promoveu a redução na mortalidade das larvas em aproximadamente 19% e 17%, respectivamente, mesmo que os valores finais sejam significativamente mais altos comparados à mortalidade observada no grupo controle (4,1%). Em vinhoto, foi observado que todos os tratamentos tiveram médias de mortalidade superiores ao grupo controle sem NEPs, porém iguais entre si.

Stomoxys calcitrans, comumente conhecida como mosca-dos-estábulos, é um vetor mecânico significativo que desempenha um papel crucial na transmissão de patógenos em ambientes pecuários, impactando a saúde animal e causando perdas econômicas. Nosso estudo foca na expressão das NADPH oxidases (NOX), enzimas que produzem espécies reativas de oxigênio (EROs) sob determinados estímulos e com papéis diversos nas atividades metabólicas e o metabolismo redox de S. calcitrans, sob condições nutricionais variadas, incluindo jejum, alimentação com sacarose e alimentação com sangue. Investigamos também os mesmos parâmetros após infecção com Herpetomonas muscarum, um tripansomatídeo monoxênico encontrado previamente infectando naturalmente a mosca por nosso grupo. O objetivo desta pesquisa é verificar a expressão das enzimas NOX e a modulação das respostas pró e antioxidante em S. calcitrans, particularmente em resposta a diferentes estados nutricionais e à infecção com o protozoário. A metodologia adotada englobou técnicas de análise bioinformática para identificação, caracterização das isoformas de NOX, seguidas de experimentos de expressão gênica quantitativa por PCR em tempo real para medir os níveis de NOX no intestino e corpo gorduroso do inseto, além das atividades redox, tanto pró como antioxidantes. Genes para as enzimas NOX 5 e DOUX1/2 foram identificados a partir do genoma de S. calcitrans, apresentando homologia com os de Drosophila melanogaster e Musca domestica Os resultados revelaram uma variação significativa na expressão dos genes das enzimas NOX em resposta aos diferentes estados nutricionais, além de um aumento notável na expressão de NOX5 no corpo gorduroso após a infecção por H. muscarum. Além disso, foi observado que o estado nutricional afeta diretamente a atividade redox, modulando tanto a produção de moléculas pró oxidantes quanto a ativação de respostas antioxidantes. As moscas em jejum e alimentadas com sangue mostraram um aumento na atividade redox, indicando um possível mecanismo adaptativo para lidar com o estresse oxidativo. Em contraste, as moscas alimentadas com sacarose apresentaram uma resposta redox menos intensa, sugerindo diferenças na gestão do estresse oxidativo de acordo com a dieta. Sugere-se um papel das enzimas NOX na regulação do metabolismo redox de S. calcitrans, influenciando a capacidade do inseto de responder a desafios nutricionais e patogênicos. A modulação da expressão de NOX e da atividade redox, investigados pela primeira no presente trabalho vez em S. calcitrans, sugere mecanismos adaptativos complexos que permitem ao inseto manter a homeostase em face de variações ambientais e infecções. Estes achados ampliam a compreensão sobre a biologia de vetores de doenças, oferecendo perspectivas para o desenvolvimento de estratégias de controle vetorial que explorem a vulnerabilidade do inseto ao estresse oxidativo.

Haematobia irritans é considerada a principal praga para a pecuária no Brasil e causa perdas econômicas à indústria pecuária mundial. Novas estratégias de controle baseiam-se em compostos mais seguros, como a classe dos reguladores de crescimento de insetos (IGRs), análogos aos hormônios juvenis, que inibem o desenvolvimento dos insetos. A eficácia oral do piriproxifen permite o desenvolvimento de formulações que garantam a segurança e extensão da ação farmacológica. Este estudo teve como objetivo desenvolver um Dispositivo Retículo-Rúmen (DRR) à base de piriproxifen, composto por filmes de poli(vinil)álcool (PVA) e carboximetilcelulose sódica (NaCMC) para controle da mosca dos chifres em bovinos. Os filmes foram obtidos pelo método de solvente casting por reticulação PVA/NaCMC. Foram submetidos à caracterização físico-química, variação de peso e medição de pH, teste do grau de inchamento (GI), determinação do teor do ativo, ensaio de liberação in vitro, análise de difração de raios X (DRX), espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), calorimetria de varredura diferencial (DSC) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os filmes foram submetidos individualmente à medição de variação de peso (n=3), com valor médio de 0,446 ± 0,02 mg e apresentaram valores de pH de 6,5 ± 0,09, próximos ao pH ruminal (6,5-7,5). O GI prevê a capacidade de absorção do filme no intervalo de tempo, e foi obtido 331,40% com capacidade de absorção. O método analítico por CLAE_UV determinou o teor do ativo nos filmes e o valor obtido foi de 104,81%. Os resultados de liberação in vitro sustentaram um perfil de liberação lenta, indicando cinética de pseudo-primeira ordem. A análise FTIR elucidou as bandas características de PVA, NaCMC e piriproxifen e demonstrou a ausência do fármaco após a liberação. As imagens de MEV mostraram alterações na distribuição de porosidade das amostras após a adição de piriproxifen, e a análise de DRX mostrou aumento na cristalinidade devido à presença de piriproxifen (Xc de 36,59%). A análise térmica elucidou que o piriproxifen sua liberação alteraram o empacotamento da cadeia polimérica, com valores de Tg de 74 ºC e Tm de 208 °C. O DRR à base de piriproxifen desenvolvido, além de cumprir as características de liberação prolongada, permite ser enrolado (forma comprimida) facilitando a deglutição e posterior conversão para a forma expandida que fica retida no rúmen durante todo o período de tratamento.

O desenvolvimento de biofilmes é um grave problema de saúde, responsável por aproximadamente 80% das infecções microbianas, incluindo infecções crônicas, nosocomiais e associadas a dispositivos médicos, que são altamente resistentes aos antibióticos convencionais. Os óleos essenciais foram avaliados quanto às propriedades antimicrobianas. O estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais (OE) de Mimosa verrucosa e Illicium verum contra células planctônicas e sésseis de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e avaliar a toxicidade com base no modelo eucariótico de Saccharomyces cerevisiae. Foram identificados trinta compostos, sendo os principais -pineno (12,6 %), -pineno (16,7 %) e (E)-cariofileno (14,2 %) para M. verrucosa, e estragol (4,2 %) e anetol (86,8 % ) para I. verum. Os resultados das concentrações inibitórias mínimas (CIM) do OE de I. verum (29,40 µg/mL) e M. verrucosa (24,89 µg/mL) contra células planctônicas mostraram 99% de eficácia contra todas as células testadas (S. aureus e E. coli). Nas células sésseis, o OE de I. verum e M. verrucosa mostrou respectiva eficácia contra S. aureus sensível, e todas as amostras foram testadas. Em ambas as análises, o teste de concentração bactericida mínima (MBC) revelou que I. verum causou morte celular para S. aureus e E. coli sensíveis. Entretanto, M. verrucosa apresentou atividade bactericida apenas contra células planctônicas. Os OEs avaliados apresentaram atividade antibacteriana e bactericida no formato planctônico. Porém, apenas I. verum apresentou atividade bactericida contra células sésseis, indicando seu possível potencial para tratamento de biofilmes bacterianos. Considerando a crescente resistência aos antimicrobianos, os OEs testados representam uma importante opção terapêutica, principalmente contra S. aureus e E. coli, que podem produzir biofilmes em diversas superfícies, tornando-se um grave problema de saúde pública.

O carrapato Amblyomma sculptum possui  ampla distribuição geográfica, alto impacto na saúde animal e transmissão de doenças zoonóticas que destacam a importância de estudar e implementar medidas de controle eficazes para mitigar os riscos associados a essa espécie. Apesar disso, informações sobre aspectos biológicos desse carrapato, como a dinâmica de hemócitos e os possíveis efeitos de interferências químicas, ainda são escassas. Os objetivos deste estudo foram caracterizar a ultraestrutura de diferentes tipos de hemócitos na hemolinfa em fêmeas ingurgitadas de A. sculptum, avaliar a eficiência reprodutiva das fêmeas ingurgitadas frente ao fluazuron e novaluron e analisar os desafios da resposta imune celular através da ação in vitro desses disruptores de crescimento de insetos, avaliando quantitativamente e morfologicamente as células da hemolinfa. As amostras de hemolinfa foram coletadas por perfuração da cutícula na região dorsal. A identificação e análise ultraestrutural de hemócitos foi realizada usando microscopia eletrônica de transmissão (MET). A avaliação in vitro da eficiência reprodutiva das fêmeas ingurgitadas de A. sculptum foi realizada após imersão em diferentes concentrações de fluazuron e novaluron. Para a resposta imune celular frente aos desafios in vitro foram realizados testes de imersão com as fêmeas ingurgitadas de A. sculptum nos grupos controle e tratados nas concentrações de 7,81, 250 e 4000μg.mL^-1 de fluazuron e 1250, 10000 e 40000μg.mL^-1 de novaluron. Nesta etapa a hemolinfa foi coletada nos tempos de 24h e 48h após a imersão. A contagem total de hemócitos foi realizada em Câmara de Neubauer e a determinação da frequência de cada tipo celular foi realizada através da confecção e análise de esfregaços de hemolinfa. Quatro tipos de células morfologicamente distintas foram identificados em fêmeas de A. sculptum através da MET: prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos e esferulócitos. Na análise da eficiência reprodutiva os valores obtidos a partir da concentração de 250 μg.mL^-1 de fluazuron atingiram eficácia satisfatória, chegando à eficácia de 100% na concentração de 4000 μg.mL^-1. Já os resultados com novaluron não apresentaram alterações significativas onde a maior concentração obteve eficácia de 11,4%. Após análise da resposta celular verificou-se que o fluazuron promoveu a diminuição significativa dos hemócitos totais na concentração de 4000 μg.mL^-1 após 48h, assim como aumentou a frequência de esferulócitos. O novaluron não causou alterações nas contagens de hemócitos totais, porém, no tempo de 24h, provocou o aumento significativo de prohemócitos nas concentrações de 10000 e 40000 μg.mL^-1, e em 48h causou o aumento dos plasmatócitos e diminuição dos granulócitos nas concentrações de 10000 e 40000 μg.mL^-1. Na MET ambos disruptores de crescimento de insetos foram capazes de promover alterações morfológicas ultraestruturais nos hemócitos fagocíticos de A. sculptum. Conclui-se que a partir da MET foi possível caracterizar quatro tipos celulares de A. sculptum: prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos e esferulócitos. Na maior concentração, o fluazuron foi capaz de inibir a eclosão das larvas, enquanto o novaluron não foi capaz de atuar de forma satisfatória sobre a eficiência reprodutiva. Além disso, o fluazuron e novaluron foram capazes de promover alterações celulares na hemolinfa de fêmeas ingurgitadas de A. sculptum após exposição in vitro. Este é o primeiro estudo a investigar as características ultraestruturais de hemócitos de A. sculptum.

Espécies do gênero Sarcocystis são protozoários parasitas intracelulares com um ciclo de vida que inclui hospedeiro intermediário e definitivo baseado em uma relação presa-predador. A maioria das espécies de Sarcocystis infecta hospedeiros específicos ou espécies hospedeiras estreitamente relacionadas, causando diversas manifestações clínicas nos hospedeiros e em alguns casos inutilizando a carne para consumo humano, pois ainda pode ser um fator de risco para a infecção humana, através da ingestão de carne crua ou mal cozida. Um total de 27 cervos oriundos do Bioparque situado no Rio de Janeiro, foram submetidos a exame post mortem de 2017 a 2023 no Setor de Anatomia Patológica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Através da histopatologia, foram analisadas amostras de tecido encefálico de quatro cervos que apresentaram alterações neurológicas, e estes foram diagnosticados com meningoencefalite, representando 14,8% das causas de morte na família Cervidae. Desses casos, três eram Rusa timorensis que tinham características histológicas compatíveis entre si, segundo critérios estabelecidos e com isso, foram diagnosticados com meningoencefalite por infecção natural por Sarcocystis sp. As amostras analisadas e observadas continham lesões macroscópicas  congruentes com  encefalite representada microscopicamente por severa reação inflamatória com presença de estruturas compatíveis com merozoítos de espécies do gênero Sarcoscystis em vasos sanguíneos. Além disso, foi realizada a imuno-histoquímica desses tecidos e a pesquisa do protozoário em sangue de cervos oriundo do banco de amostras de sangue do BioParque através da análise molecular. Esse estudo envolve o registro da presença da infecção natural por espécie de  Sarcocystis  nas lesões microscópicas  associadas as manifestações neurológicas em cervos mantidos sob cuidados humanos do BioParque da cidade do Rio de Janeiro, além do seu diagnóstico, seus aspectos macro e microscópicos e sua apresentação clínica e epidemiologia são descritas.

Inúmeras espécies de animais domésticos e silvestres atuam como reservatórios de hemoparasitos transmitidos por carrapatos, causando hemoparasitoses de grande importância para a saúde pública, como por exemplo, a Febre Maculosa Brasileira. Conhecida por causar febre alta, esta doença é uma zoonose com distribuição mundial e é causada por bactérias da família Rickettsiaceae, apresentando um complexo diagnóstico. A detecção do agente tem sido facilitada devido ao acesso às técnicas moleculares, como a reação em cadeia da polimerase (PCR). Os militares em treinamentos ou operações, em função das atividades frequentes e período de exposição prolongado, estão mais predispostos a infestações e sob maior risco de infecção por bactérias da família Rickettsiaceae. Logo, o objetivo do presente estudo foi realizar o diagnóstico molecular de Rickettsia spp. em carrapatos parasitando humanos, animais domésticos e silvestres circulantes de áreas pertencentes a Academia das Agulhas Negras, Resende, Rio de Janeiro, Brasil. Foram utilizadas uma amostragem de carrapatos infestando diferentes espécies de hospedeiros vertebrados (humanos, animais silvestres e domésticos) coletados e identificados por Prado (2022) durante os anos de 2019 a 2021. Uma amostra aleatória estratificada de 494 carrapatos foram selecionados para serem testados molecularmente para a presença de Rickettsia spp. correspondendo a 52 amostras de carrapatos em animais domésticos, 138 amostras de carrapatos em animais silvestres capturados, 37 amostras de carrapatos em pequenos mamíferos, 200 amostras de carrapatos em catetos e 67 amostras de carrapatos em militares. As amostras foram submetidas à extração de DNA, em seguida à uma amplificação prévia da sequência parcial do gene ITS-2 nuclear de carrapatos (familia Ixodidae) para controle de qualidade da extração e PCR convencional para a detecção de DNA alvo correspondente ao gene gltA de Rickettsia spp.. Uma amostra de A. dubitatum foi positiva durante as reações moleculares, amplificando o fragmento do gene gltA de Rickettsia spp.. A amostra correspondente pertence a Hydrochoerus hydrochaeris. Este achado revela que animais silvestres podem albergar agentes rickettsiais, e faz um alerta sobre animais como sentinelas e até mesmo para humanos que se encontram em áreas de vulnerabilidade. Sendo necessário aprofundamento do estudo, além da realização do sequenciamento.

Responsável por afetar a atividade pecuária com perdas econômicas em decorrência do seu parasitismo, a mosca-dos-chifres, Haematobia irritans, é literalmente irritante para os bovinos, pois suas picadas incessantes interferem no ganho de peso e na qualidade do couro, o que prejudica diretamente a produção de leite e de carne. Esses fatores afetam a saúde e o bem-estar desses animais, sendo indispensável o controle deste ectoparasito, feito por muito tempo de forma indiscriminada com inseticidas sintéticos, causando resistência das moscas a alguns desses fármacos. No intuito de diminuir o uso dessas moléculas sintéticas e assim, reduzir danos aos animais, humanos e ao ambiente, uma alternativa é a utilização de óleos essenciais (OEs) com amplo espectro de ação inseticida, porém, poucos OEs foram testados contra H. irritans. Por isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade inseticida dos OEs de Eugenia caryophyllus (cravo-da-índia), Cinnamomum cassia (canela cássia), Thymus vulgaris (tomilho branco) e Illicium verum (anis estrelado) sobre moscas adultas de H. irritans, além de determinar seus valores de concentração letal (CL): CL₅₀ e CL₉₀. Os OEs foram obtidos comercialmente e seus constituintes foram determinados através de cromatografia gasosa, sendo os majoritários respectivamente: eugenol, (E)-cinamaldeído, timol e ocimeno, e (E)-anetol. Os espécimes oriundos de bovinos naturalmente infestados da área de campo do Laboratório de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinária (LQEPV) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) foram expostos a discos de papel filtro (63,62cm²) impregnados com diferentes concentrações dos OEs em placas de Petri (90x15mm). As avaliações da mortalidade das moscas foram feitas 2 e 4 horas após a exposição. As concentrações que apresentaram 100% de mortalidade na avaliação de 2h foram de 11,79 e 15,72 µg/cm² para cravo; 39,30 µg/cm² para canela, 47,15 µg/cm² para tomilho e 235,77 µg/cm² para anis. E na avaliação de 4h de 15,72 µg/cm² para cravo, 15,72 e 39,30 µg/cm² para canela, 31,44 e 47,15 µg/cm² para tomilho, e 157,18 e 235,77 µg/cm² para anis. As CL₅₀ e CL₉₀ foram calculadas estatisticamente por meio da análise Probit pelo programa RStudio Team Software com intervalo de confiança de 95% (p≤0,05). As CL₅₀ dos óleos em 2 e 4h foram: 5,04 e 5,27 µg/cm² para cravo, 8,57 e 5,03 µg/cm² para canela, 18,57 e 14,08 µg/cm² para tomilho e 83,91 e 71,88 µg/cm² para anis. Já as CL₉₀ em 2 e 4h foram: 11,71 e 10,03 µg/cm² para cravo, 19,26 e 11,22 µg/cm² para canela, 27,41 e 18,80 µg/cm² para tomilho e 132,78 e 101,30 µg/cm² para anis. Com exceção da CL₅₀ do OE de cravo, todas as CLs após as 4h de exposição reduziram. Apesar disso, o óleo que apresentou maior potência foi o OE de cravo, seguido dos OEs de canela, tomilho e anis. Concluindo que, todos os óleos avaliados apresentaram atividade inseticida in vitro contra a mosca H. irritans.

A doença periodontal (DP) advém da formação de biofilme bacteriano na superfície dos dentes e em seus tecidos adjacentes. É caracterizada como a condição oral mais prevalente em humanos e animais, estando presente em cerca de 70% dos cães adultos. Na medicina veterinária, sua profilaxia e tratamento é dificultado, uma vez que estabelecer uma rotina de higienização não é simples e a permanência das formulações convencionais na cavidade oral é prejudicada pela ação saliva e da atividade mecânica da boca. Assim, inovação nesse campo é essencial, principalmente diante da resistência bacteriana que pode estar envolvida nos diferentes estágios da doença. Nesse contexto, a utilização de produtos advindo de fontes naturais se torna uma alternativa aos produtos convencionais. Como é o caso dos flavonoides, que se destacam devido às suas propriedades antimicrobianas, além de possuírem ação regeneradoras dos tecidos moles e duros, os mesmos que compõe a mucosa oral. Entre eles,  há a quercetina (QRC) e a rutina (RTN), que já possuem relatos evidenciando sua atividade antimicrobiana frente a cepas sensíveis e resistentes. Deste modo, este estudo buscou estimar  as concentrações inibitória e bacteriostática mínimas destes dois flavonóides frente a nove cepas, sensíveis e resistentes, de importância para a DP. Após os ensaios, a QRC se mostrou mais promissora, sendo então selecionada como molécula ativa para os ensaios de desenvolvimento farmacêutico. Foram desenvolvidos: um hidrogel (HG) e um filme à base de carboximetil celulose sódica (CMC-Na) e um HG à base de quitosano (QTS). Como resultado, as formulações mantiveram pH na faixa de 6,5 a 7,5, assegurando a segurança durante a aplicação, salvo o HG de QTS que apresentou um pH ligeiramente abaixo do ideal. O teor dos HG (CMC-Na e QTS) assim como o filme, foram de 98,2%, 95,0% e 97%, respectivamente. As formulações demonstraram tempos de residência prolongados, estando acima de 5h. Quanto à liberação in vitro, o HG de CMC-Na apresentou cinética de ordem zero e taxa de liberação de 32,1% em 24 h, enquanto o HG  de QTS e o filme polimérico, exibiram cinética de pseudoprimeira ordem com taxas de liberação de 18,6% e 26% em 24 h, respectivamente. Análises morfológicas do filme polimérico revelaram poros nas formulações contendo QRC e maior compactação no filme placebo. As análises estruturais demonstraram que a presença de QRC não altera a estrutura dos componentes presentes no filme, apenas reflete em um estiramento C=C mais intenso. A associação de todos os resultados indicou que as formulações desenvolvidas apresentam potencial inovador para prevenir e tratar a DP canina.

Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae) é uma mosca hematófaga obrigatória, ectoparasita de diversas espécies de mamíferos, sendo bovinos e equinos os mais impactados por seu hábito alimentar agressivo e persistente. Surtos populacionais, relacionados ao aumento da atividade sucroenergética em áreas de produção pecuária, e a capacidade aumentada de resistência a inseticidas, intensificam a preocupação com a espécie, uma vez que ela é responsável pela disseminação mecânica de diversos patógenos entre os animais parasitados, assim como gera onerosas perdas à bovinocultura. Dessa forma, estudos que possibilitem o desenvolvimento de estratégias de controle do inseto são de grande importância. O hábito alimentar generalista de S. calcitrans gera interessante ponto de investigação. Por esse motivo, durante este trabalho foi analisado a influência de diferentes alimentações (solução de sacarose e sangues bovino, equino, ovino, de coelho e humano) e substratos de desenvolvimento (à base de cana-de-açúcar e feno de alfafa) na biologia da mosca. Análises sobre o comportamento alimentar, demonstraram maior atração da mosca aos sangues bovino e equino e à solução de sacarose, sendo consistentes com os hospedeiros preferenciais da mosca na natureza e ao hábito de consumir alimentações açucaradas em seu habitat natural. Experimentos de longevidade demonstraram maior sobrevivência em moscas alimentadas com sangue ovino, seguido por bovino, desenvolvidos em substrato à base de cana-de-açúcar. Demonstrando ainda a alimentação com sangue ovino, em ambos os substratos, os maiores valores de potencial reprodutivo para a espécie. Contrariando nossas expectativas, a alimentação com sangue equino demonstrou impactos negativos à sobrevivência e reprodução da mosca, apesar de cavalos serem considerados um de seus hospedeiros preferenciais. Ao observar o desenvolvimento dos ovários, atraso no desenvolvimento do órgão foi observado em decorrência da alimentação com sangue equino e de coelho, tendo as alimentações com sangue bovino e ovino demonstrado padrões superiores de desenvolvimento, demonstrando resultados pertinentes aos índices de oviposição analisados. As diferentes alimentações e substratos de desenvolvimento não apresentaram resultados significativamente diferentes entre os grupos analisados. As alterações observadas possivelmente estão fundamentadas nas diferenças nutricionais de cada condição, assim como nos impactos diretos à digestão e à microbiota. O maior conhecimento sobre a biologia de S. calcitrans contribui para o desenvolvimento de novas estratégias de controle ao mesmo tempo em que buscamos otimizar os parâmetros de produção das mocas em colônia.

O presente trabalho teve por objetivo realizar a detecção molecular, caracterização e análise morfológica de bactérias da família Anaplasmataceae e Mycoplasmataceae em populações de pequenos mamíferos em áreas de Floresta Amazônica, no estado do Acre, Brasil. A importância desta investigação está pautada em bactérias intracelulares obrigatórias que participam nos ciclos silvestres como agentes zoonóticos, e, portanto, de interesse para a saúde humana, além de parasitos de importância para os animais domésticos, e a própria ecologia e ciclo de vida do animal hospedeiro. As áreas de estudos se concentram em áreas de mata da floresta amazônica, na cidade de Rio Branco, estado do Acre, Brasil. Para o diagnóstico direto foram utilizadas 186 amostras de lâminas de esfregaço sanguíneo, oriundas de roedores, marsupiais e morcegos capturados previamente, visando a detecção, caracterização e medição de inclusões sugestivas de bactérias da família Anaplasmataceae e Mycoplasmataceae. Amostras de fígado armazenado em RNA Later®, com extração de DNA pelo kit “DNeasy Blood & Tissue” (Qiagen®), foram utilizadas no diagnóstico molecular. Dentre as amostras de tecido hepático analisadas, 14,52% (n=27/186) foram consideradas positivas para Mycoplasma sp. através de PCR usando os primers Myco 322s e Myco 938as, que amplificam 620 pares de bases do fragmento de 16S rDNA. O diagnóstico para Anaplasmataceae foi dificultado pela inespecificidade das reações de PCR com os pares de primers testados, e quando a técnica foi específica, resultou em fragmento de 16S rDNA de Wolbachia sp. Portanto, estes dados de positividade não foram considerados para análise. A positividade em lâmina de esfregaço sanguíneo para bactérias da família Anaplasmataceae foi de 6,99% (n=13/186), enquanto para micoplasmas hemotrópicos foi de em 1,61% (n=3/186). Quanto à localidade, houve diferença estatística significativa entre as áreas de São Raimundo e Floresta Piracema e as áreas de Santa Cecília, EMBRAPA, APA do Amapá e Colégio Agróciola, onde São Raimundo e Floresta Piracema apresentaram maior percentual de positividade para Mycoplasma sp. quando comparado as demais. Com relação ao resultado de sequenciamento de fragmento do 16S rDNA de Mycoplasma sp., três amostras de morcegos dos gêneros Glossophaga (22052), Artibeus (22108), Carollia (22152) tiveram suas sequências com boa leitura no cromatograma, com aproximadamente 600pb. O maior percentual de similaridade Blast para 22052 foi de 98,41% com amostra de Glossophaga commissarisi (LR699022), da Suíça; para 22108 foi de 99,82% com amostra de Platyrrhinus lineatus (MZ048291), do Mato Grosso do Sul, Brasil; e para 22152 foi de 98,28% com amostra de Desmodus rotundus de Belize (KY932722). Este estudo revelou diferentes genótipos de Mycoplasma sp. presentes em morcegos e demonstrou a presença de mórulas em leucócitos e plaquetas, características de bactérias da família Anaplasmataceae em roedores, marsupiais e morcegos. Estes achados sugerem que micoplasmas hemotrópicos são endêmicos em morcegos do Acre, e que muito ainda há de ser descoberto em relação as espécies de bactérias intracelulares obrigatórias nestes animais.

A Mata Atlântica é um dos maiores centros de biodiversidade e endemismo de espécies do mundo. O relevo é um dos elementos responsáveis por produzir tanta diversidade. As condições ambientais das montanhas são muito diferentes das áreas de baixada porque apresentam maior amplitude térmica, restrição hídrica e maior isolamento geográfico. Como resultado, as espécies experimentam adaptações que refletem as variações ambientais e podem interromper os intercâmbios bióticos com as planícies vizinhas. Parasitas hematozoários como Trypanosoma sp. são transmitidos por uma série de vetores dípteros abundantemente presente neste ambiente, acometendo a maioria dos hospedeiros locais e podendo exercer pressão seletiva sobre a avifauna, causando efeitos deletérios na saúde, no sucesso reprodutivo, comportamento e estrutura das comunidades. O objetivo deste trabalho foi correlacionar o gradiente de elevação do Parque Nacional do Itatiaia (PNI) à frequência e diversidade de Trypanossoma sp. no sangue de aves silvestres utilizando esfregaços sanguíneos em lâmina, PCR e sequenciamento. Dos 230 esfregaços em lâminas observados em microscopia foram encontrados em 17 (7,39%) a forma tripomastígota de Trypanossoma sp. e 42 (18,26%) amostras foram  positivas em PCR. Todas as amostras positivas na citologia foram positivas na PCR. Ao correlacionar esses resultados com o gradiente de altitude teve se uma frequência de 27,9% abaixo 1.000 metros e 9,2% acima de 2.000 metros. As análises filogenéticas revelaram 17 novas sequências muito próximas a Trypanosoma  Polygranularis encontrado em  Peliperdix lathami  Camarões, África. Uma única sequência   agrupou-se próximo ao clado de Trypanosoma everetti um ramo  próximo a espécie Trypanosoma everetti-like encontrado no hospedeiro  dumetella carolinensis , USA. Nosso estudo demonstrou a diversidade e prevalência de espécies de Trypanosoma em diferentes gradientes de altitude no PNI. Existe uma baixa diversidade genética entre as linhagens de Trypanosoma em aves silvestres no Parque Nacional de Itatiaia, onde 17 das 18 sequências obtidas neste estudo estão filogeneticamente relacionadas a Trypanosoma polygranularis. As linhagens de Trypanosoma sp. obtidas neste estudo possui baixa especificidade parasitária sendo identificadas em 12 espécies de aves.

O Brasil é o maior exportador e produtor de carne de frango no mundo. Essas aves possuem naturalmente a presença de bactérias como Escherichia coli no trato gastrointestinal que podem causa adoecimento ou até morte desses animais. Visando evitar isto, antimicrobianos têm sido adicionados na água e ração como medida profilática e atuando como melhorador de desempenho. Porém, isso pode favorecer a seleção de bactérias resistentes aos antimicrobianos existentes. Dentre os mecanismos de resistência em bactérias Gram-negativas, o mais importante é a produção de enzimas beta-lactamases, destacando-se as do tipo de espectro ampliado (ESBL) e AmpC. Sabendo-se que durante esse processo de produção de carne aviária há o consumo em torno de 5.000 a 21.000 L de água por tonelada de carne, gerando grande quantidade de efluentes ao longo da cadeia de abate, entende-se que a água é mais uma via de disseminação das bactérias multirresistentes presentes neste ambiente, potencializando a transmissão entre os animais, o meio ambiente e seres humanos. Dessa forma, o presente estudo buscou avaliar qualidade de águas circulantes de um abatedouro aviário e, traçar um perfil de resistência e detectar de forma fenogenotípica a presença de isolados de Escherichia coli produtoras de ESBL e AmpC através de amostras de água. As amostras foram coletadas no município de São José do Vale do Rio Preto, na região Serrana do Estado do Rio de Janeiro, onde deságua o rio Preto, em diferentes pontos de passagem de água do abatedouro de frangos, totalizando 16 amostras. Para determinar o número de coliformes totais e coliformes termotolerantes utilizou-se a técnica do Número Mais Provável (NMP). A água da entrada do abatedouro estava dentro do padrão exigido pela legislação, enquanto os efluentes tratados estavam ejetando uma carga que excede o limite máximo de qualidade. Foram isoladas e identificadas por MALDI-TOF MS, 76 Escherichia coli. Ampicilina foi o antibiótico menos eficaz e Meropenem o mais. Além disso, 61,8% (47/76) apresentaram resistência a pelo menos um antibiótico, sendo dentre estas 6,38% (3/47) consideradas multirresistentes (MDR). Em relação aos diferentes pontos de coleta, observa-se que a entrada apresenta menor diversidade de resistência a antibióticos quando comparado ao que sai. Entre os isolados analisados,19,7% (15/76) indicou possível produção de ESBL e 6,6% (5/76) de AmpC no Teste de Disco Difusão. No Teste de Sensibilidade de Duplo Disco (TSDD), 10,5% (8/76) foram positivos 11,8% (9/76) para o Teste de Aproximação com CAZ/CZC e 15,8% (12/76) com CTX/CTC e 3 cepas  foram positivas para produção das enzimas nos testes confirmatórios. Dentre os 76 isolados, 21% (16/76) positivaram para o gene bla_CTX-M-1, e 17,1% (13/76) para o gene bla_CMY-2, onde 6,5% (5/76) apresentaram co-produção do gene. Ao se comparar esses dados com o fenotípico, percebe-se que 68,7% (11/16) possuíam o gene bla_CTX-M-1 mas não apresentaram fenótipo de ESBL e 84,6% (11/13) apresentaram o gene bla_CMY-2 sem apresentar resistência a cefotaxima. O presente trabalho possibilita entender o impacto desses estabelecimentos de produção como contribuintes para o fenômeno da resistência antimicrobiana através da água em uma perspectiva de Saúde Única.

Anaplasma platys é uma bactéria gram-negativa, intracelular obrigatória, com tropismo para as plaquetas e agente etiológico da Trombocitopenia Cíclica Infecciosa Canina (TCIC), enfermidade distribuída mundialmente, transmitida pelo carrapato ixodídeo Rhipicephalus sanguineus sensu lato e comumente associada, como o nome indica, à trombocitopenia em cães. É predominante em regiões de clima subtropical e tropical, incluindo o Brasil, onde ocorre com prevalências que variam de 2 a 55%, com relatos em todas regiões do país. É sabidamente um agente zoonótico e seu vetor já foi descrito parasitando seres humanos no Brasil. Apesar de sua importância, vários aspectos da infecção ainda são desconhecidos em muitos locais do país. Desta forma, este estudo objetivou determinar a prevalência, por métodos hematológicos e moleculares, analisar os apectos epidemiológicos, e avaliar a diversidade genética de A. platys, utilizando o gene gltA, em amostras de sangue total de cães trombocitopênicos naturalmente infectados de duas mesorregiões do estado do Rio de Janeiro. Foram utilizadas 404 amostras de sangue total de cães trombocitopênicos, das mesorregiões Metropolitana e Sul Fluminense, do estado do Rio de Janeiro, para a realização de hemograma, pesquisa de hemoparasitos em esfregaço sanguíneo e diagnóstico molecular, sequenciamento genético e análise filogenética. Além disso, foi verificada a correlação das variáveis sexo, raça e idade dos cães com a positividade para A. platys. Das amostras analisadas, 4,7% (19/404) amplificaram para o gene gltA de A. platys. Destas, 15 foram submetidas ao sequenciamento e análise da diversidade genética. As sequências mostraram identidade entre 99-100% com isolados de países de vários continentes e formaram um clado único. Anemia, hipocromia, hipoproteinemia e a variável sexo (cães machos), tiveram associação com a positividade por A. platys. Os resultados demonstraram que existe um genótipo de A. platys circulante no estado do Rio de Janeiro e que cães machos são os mais infectados pelo patógeno.

A seleção de um método de extração de DNA ideal deve levar em conta fatores como sensibilidade, consistência, rapidez e facilidade de execução. A literatura carece de evidências suficientes para apoiar a escolha de um método específico para extrair DNA de amostras de sangue total de aves. O objetivo deste trabalho foi padronizar um método de extração de DNA genômico a partir de sangue de ave selvagem coletado em FTA® Card.Foram testados 5 protocolos,entre eles: o Kit DNeasyBlood & Tissue (Qiagen), PureLink® Genomic DNA Mini Kit (Invitrogen), Salting Out, Hotshot e Fenolclorofórmio. Foi realizada a quantificação por espectrofotometria e fluorimetria, análise da pureza por espectrofotometria e análise por qPCR e integridade do material genético extraído.As amostras extraídas protocolo do Kit Comercial “PureLinkGenomic DNA Mini” apresentaram características visivelmente melhores quanto aos parâmetros avaliados comparada com as demais, obtendo então melhor resultado e maior eficiência. No teste de inibição houve um destaque para o kit da Invitrogen e para o método de Salting out que apresentam média de Cq mais baixas (p-valor 0,0568), contudo o kit apresentou valor mais baixo desvio padrão. Este estudo fornece base científica para a extração de DNA genômico de alta qualidade a partir de quantidades pequenas quanto de sangue, quando as amostras são armazenadas em cartões FTA®. Isso é particularmente benéfico para a pesquisa com aves, dada a grande variação de tamanhos e pesos entre as espécies. Conclui-se que a padronização de protocolos desempenha um papel fundamental na biologia molecular, uma vez que a extração eficiente de material genético é essencial para o sucesso das análises subsequentes. A Mata Atlântica é um dos biomas mais ricos em biodiversidade do mundo e abriga uma variedade impressionante de aves silvestres. Os parasitos pertencentes ao gênero Haemoproteus são classificados na família Haemoproteidae e têm como vetores insetos hematófagos das famílias Ceratopogonidae e Hippoboscidae. O objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade genética de parasitos do gênero Haemoproteus no bioma Mata Atlântica, nos Parques Nacionais do Caparaó (MG), de Itatiaia e da Serra dos Órgãos (RJ), entre 700 e 2500 metros de altitude. Dentre as 586 aves amostradas, 94 foram positivas para Plasmodium/Haemoproteus, sendo obtida uma prevalência geral de 16,04% (n=94/586). Na análise filogenética as sequências obtidas neste estudo agruparam-se em 6 clados bem suportados. O clado A foi composto por 10 amostras que se agruparam em clado exclusivo, tendo como grupo irmão Haemoproteuserythrogravidus. No clado B, quatro amostras se agruparam no grupo de Haemoproteuserythrogravidus. No clado C, quatro amostras formaram um grupo exclusivo, tendo como grupo irmão Haemoproteuszosteropis. Um total de 13 amostras se agruparam no clado deHaemoproteusnucleocentralis (clado D), 5 amostras no clado de Haemoproteusparaortalidum(clado E). As linhagens agrupadas no clado B só foram encontradas emZonotrichia capensis. O clado C foi encontrado somente a 1500 metros de altitude. Com relação aos locais amostrados, H. erythrogravidussó foi encontrado no PN do Caparaó. E não houve ocorrência deHaemoproteusparaortalidum no PN da Serra dos Órgãos. Uma prevalência e diversidade genética relativamente alta em aves silvestres foi observada na região estudada. Através dos resultados obtidos neste estudo, enriquecemos o conhecimento sobre a diversidade global de parasitos do gênero Haemoproteus em aves endêmicas de diferentes espécies que ocorrem em áreas altimontanas da Mata Atlântica do Brasil. 

O mosquito Aedes aegypti possui grande importância na cadeia epidemiológica de arboviroses que afetam a  Saúde Pública. Pensando na resistência a inseticidas químicos e soluções de controle mais ecológicas, estuda-se cada vez mais o uso de fungos entomopatogênicos como alternativa de controle de A.aegypti. Esse trabalho investigou os efeitos de Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana sobre a oviposição, morfologia ovariana e perfil lipídico no corpo gorduroso e ovários de fêmeas expostas aos fungos, além de investigar a atividade antimicrobiana em larvas de A. aegypti desafiada por esses fungos. Para avaliar o efeito da exposição fúngica sobre a oviposição e morfologia de ovários, fêmeas com 6 a 8 dias pós-emergência foram alimentadas com sangue de camundongo e expostas ou não a M. anisopliae CG 153 na concentração 107 conídios/mL por 24h, sendo formados os seguintes grupos: G1= exposto ao fungo minutos antes da alimentação; G2= alimentado 24h antes da exposição fúngica; G3= alimentado 24h após exposição fúngica; CTR= exposto à Tween 80 a 0,03% minutos antes da alimentação. Ovários foram dissecados em 0, 24, 48 e 72h e a investigação foi realizada por histopatologia. Não foi observada diferença estatística nos seguintes parâmetros: quantidade de fêmeas ingurgitadas em cada grupo (P=0,6358); quantidade de ovos totais produzidos (P~0,5948); comparação entre a quantidades de ovos por fêmea alimentada (P=0,3191); ou na quantidade de mosquitos vivos no final dos experimentos (P=0,7507). Os folículos ovarianos dos mosquitos expostos a M. anisopliae CG153 apresentaram perda da arquitetura tecidual após 48h de tratamento, com rompimento do epitélio folicular, redução do número de oócitos e alterações na morfologia de nurse cells. Para avaliar o efeito da exposição fúngica sobre o perfil lipídico, fêmeas (6-8 dias pós-emergência; N=45) foram expostas a M. anisopliae CG 153 ou B. bassiana CG 479 na concentração 107 conídios/mL ou Tween 80 a 0,03%. Após 24, 48 ou 72h de exposição, os ovários e corpo gorduroso das fêmeas foram dissecados, para extração de lipídios e posterior análise de lipídios neutros por cromatografia em camada delgada unidimensional. Não houve diferença estatística no perfil de ácido graxo e colesterol no corpo gorduroso (P=0.7705 e P~0,8365) e ovários (P=0.9798 e P>0,9999) nos tempos observados após a exposição. Grupos de 700 larvas de segundo estádio foram imersas em 700 mL de suspensão de B. bassiana CG 479 na concentração 106 conídios/mL ou Tween 80 a 0,03%. Após 16, 24, 40 e 48h de exposição, um pool de 60 larvas (N=240) foram maceradas para avaliação da atividade antimicrobiana através da realização de antibiograma sobre cepas de Escherichia coli, Staphylococcusaureus e Pseudomonas sp. resistentes e sensíveis a betalactâmicos. No entanto, não foi identificada atividade antimicrobiana em macerado de larvas mesmo após 48 horas de exposição a B. bassiana CG 479. Assim, mais estudos sobre os efeitos dos isolados de M. anisopliae CG 153 e B. bassiana CG 479 sobre larvas e fêmeas de A. aegypti devem ser realizados para melhor compreensão da dinâmica fungo-hospedeiro.

A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença crônica e fatal, causada pelo protozoário Leishmania infantum, que também infecta seres humanos e outras espécies animais. Sua transmissão acontece por flebótomos infectados da espécie Lutzomyia longipalpis, sendo o cão o principal reservatório doméstico. O Brasil atualmente não dispõe de um sistema de vigilância em tempo real para notificação de LVC e as informações sobre números de animais infectados e agravos são falhos e subdimensionados, não tendo a mesma centralidade e mecanismos semelhantes utilizados nos sistemas de vigilância em saúde humana. A LVC tem impactos grandes na saúde dos animais e humana que por falta de um sistema integrado de notificação podem não representar as curvas de tendências desta doença e ficam muitas vezes restritas às publicações de instituições de ensino e pesquisa e informações técnicas. Foram realizados 477 registros de casos confirmados de LVC no sistema a partir de viagens de treinamento em vigilância e realização do diagnóstico e dos dados de casos confirmados LVC do Ministério da Saúde. A inclusão dos dados permitiu a partir do sistema a construção e visualização de mapas para avaliar a distribuição e georreferenciamento dos casos, a inclusão de fotos, vídeos e imagens do Google Earth. O aplicativo funcionou de forma uniforme e mesmo em áreas de ausência de sinal permitiu a localização a partir dos dados do GPS do dispositivo móvel. Todos os dados coletados a partir do aplicativo foram importados para a plataforma de vigilância e controle sem perda dos dados ou informações coletadas. O aplicativo permitiu a construção de formulário para cadastro dos casos e inclusão de dados permitindo a exportação em diversos formatos para posterior análise e identificação. Os dados obtidos no presente trabalho permitiram a construção de um mapa de distribuição espacial dos casos de LVC, sendo possível verificar uma maior concentração de casos nas regiões Nordeste, Norte, Centro-Oeste e Sudeste, coincidindo com a mesma distribuição de ocorrência de casos humanos de leishmaniose visceral. O uso do aplicativo de vigilância e controle (ViconSaga mobile) se mostrou uma ferramenta viável, de baixo custo, customizável, sendo uma alternativa para o registro de casos de LVC, contribuindo para a obtenção de dados centralizados sobre a LVC. A ferramenta permitirá a realização de um conjunto de ações para o conhecimento e detecção dos fatores determinantes e condicionantes da LVC com a finalidade de recomendar medidas de prevenção e controle sugerindo, assim, uma metodologia que possa ser empregada em âmbito nacional pelos serviços de vigilância oficiais. O objetivo geral deste estudo era verificar a eficácia e usabilidade do aplicativo para dispositivos móveis como ferramenta de coleta de dados ViconSaga para o registro dos casos de LVC, e apoio a vigilância e controle de Leishmaniose visceral canina. A estudo objetivou o registro de casos de leishmaniose em cães a partir de testes sorológicos imunocromatográficos, a partir de viagens de treinamento e capacitação e vigilância epidemiológica, em todas as regiões do Brasil, realizando o georreferenciamento e uma análise espacial dos casos de LVC a partir dos registros do aplicativo e da plataforma, Avaliar a eficiência do sistema de notificação mobile através da plataforma para estudos epidemiológicos., Avaliar os resultados obtidos pela notificação e inseridos na plataforma em relação aos dados oficiais do sistema de vigilância sanitária e contribuir para a percepção da LVC no Brasil

As leishmanioses encontram-se entre as principais endemias mais prevalentes e negligenciadas no mundo inteiro sendo de grande importância em saúde Pública. A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa, zoonótica, causada pelo protozoário Leishmania infantum, um parasito intracelular obrigatório das células do sistema fagocítico mononuclear de hospedeiros vertebrados. A transmissão do parasito para seres humanos e animais ocorre primariamente por meio da picada de fêmeas de flebotomíneos infectados, popularmente conhecidos como “mosquitos palha”. Na região Sudeste do Brasil, o município de Volta Redonda, interior do estado do Rio de Janeiro, vem apresentando casos de leishmaniose visceral canina (LVC), além de casos humanos notificados. O capítulo I da tese teve como objetivo realizar o levantamento de casos de Leishmaniose visceral canina (LVC) no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) do município de Volta Redonda (VR), interior do estado do Rio de Janeiro (RJ), no período de Janeiro de 2016 a Dezembro de 2020, utilizando a Plataforma VICON SAGA para georreferenciamento dos casos. Foi observado que a busca/procura por diagnóstico no CCZ do município de Volta Redonda vem aumentando com o passar dos anos; o número de animais diagnosticados para LVC aumentou em 286% no período de pesquisa; as lesões de pele são as principais alterações clínicas encontradas em pacientes positivos para LVC; o grande número de bairros apresentando casos positivos de LVC alerta para a ocorrência da doença, principalmente em áreas urbanas; a plataforma VICON SAGA permitiu identificar áreas com maior ocorrência de LVC e consequentemente as áreas de maior risco; o perfil dos animais atendidos no CCZ de VR são animais SRD, com pelo curto, porte médio e apresentando sinais clínicos inespecíficos. Já o capítulo II, teve como objetivo realizar uma revisão sitemática para elucidar os principais fatores epidemiológicos associados à LVC, na América do Sul, no período de 2000 a 2020, utilizando como bases de dados as plataformas PubMed, Lilacs, Web of Science e Scopus. Dos 3076 artigos encontrados, 20 estudos epidemiológicos foram selecionados. Conclui-se que fatores associados ao ambiente são os mais estudados em todos os estudos epidemiológicos e quanto maior a proximidade dos abrigos dos cães de regiões de mata, maior a chance da infecção por L. infantum; não é possível estabelecer associação entre raça e a maior ocorrência de infecção por L. infantum; artigos que conseguiram estabelecer correlação com a idade, relataram que animais adultos são os mais expostos.

Os coccídios são protozoários intracelulares obrigatórios que infectam a maioria dos invertebrados, todas as classes dos vertebrados, incluindo os animais domésticos, silvestres e seres humanos. Apresentam ciclos de vida intestinais, embora sejam observados, em algumas espécies, estágios de vida extra-intestinais. São geralmente identificados a partir de amostras fecais. O Brasil apresenta uma diversa avifauna representada atualmente por 1.971 espécies de diferentes ordens, dentre as quais destacam-se os Passeriformes, ordem mais representativa que é frequentemente positiva para diferentes espécies de coccídios parasitas, principalmente dos gêneros Isospora Schneider, 1881 e Eimeria Schneider, 1875. O estudo das interações entre esses parasitos e hospedeiros nos permite entender diversos processos ecológicos, evolutivos e comportamentais, incluindo seleção sexual, sucesso reprodutivo, migração, competitividade, dentre outras. Atualmente, existem diversas técnicas e metodologias que podem ser aplicadas para identificação de uma espécie coccidiana além da análise morfológica, desde a confirmação da suscetibilidade do hospedeiro, determinação da densidade parasitária, grau de patogenicidade e identificação de diferenças inter- e intra-específicas que fornecem ajustes taxonômicos relevantes. Finalmente, o advento da Biologia Molecular, prática reconhecida e estabelecida, principalmente no estudo de parasitas coccidianos dos animais de produção, oferece informações complementares as de microscopia e métodos imunológicos, por exemplo, pois o sequenciamento do DNA do microrganismo, serve como estudo adicional para a taxonomia e filogenia. Baseando-se nestes fatos, este trabalho, nos capítulos I, II, III e IV teve por objetivos, identificar geneticamente coccídios parasitas de aves silvestres capturadas em regiões de Mata Atlântica do Sudeste brasileiro, demonstrando o isolamento de oocistos de coccídios de amostras fecais de aves silvestres, com posterior extração de DNA a fim de amplificar e sequenciar diferentes regiões gênicas dos genes cox1, cox3 e fragmentos da subunidade pequena e grande do rDNA do DNA mitocondrial, avaliando a aplicabilidade destas novas sequências na diferenciação de espécies e estudos filogenéticos.

Os macrófagos são células fagocíticas do sistema imunológico inato presentes em diversos órgãos compondo uma população celular envolvida na homeostase e proteção dos tecidos. Essas células podem se diferenciar, de acordo com o microambiente em células capazes de eliminar microrganismos patogênicos ou em células capazes de restabelecer o equilíbrio do tecido danificado. Sua plasticidade os coloca como alvos de diversos fármacos capazes de direcionar sua resposta a inúmeras doenças. As leishmanioses são um conjunto de manifestações clínicas que afligem 1 milhão de pessoas anualmente em condições precárias de saúde. Os macrófagos são as células hospedeiras do parasito Leishamania sp. abrigando formas amastigotas que se multiplicam até lisarem a célula estabelecendo assim a infecção. Os medicamentos para esta doença são tóxicos e extremamente carosinviabilizando o consumo e a distribuição em larga escala. Produtos naturais são uma opção de fácil acesso, baixo custo e seguros com atividades farmacológicas e sua estrutura química permite modificações para seu aperfeiçoamento. Nós avaliamos a ação imunomoduladora de 3 produtos naturais (-)-Guaiol, Piperina (AF1), 1,8-cineol e de um derivado sintético de piperina: N4-cyclohexyl-1,2,4-triazol-3- thione (AF2) em diferentes linhagens de macrófagos murinos P388D1 e RAW 264.7 e canino DH82 estimulados com LPS. Os compostos demonstraram uma atividade leishmanicida in vitro dose dependente para promastigotas de Leishmania amazonensis com IC50 de 56,24 µM, 9,36 µM e 8.73 µM para (-)-Guaiol, AF1 e AF2, respectivamente. As linhagens celulares apresentaram viabilidade acima de 70% nos tratamentos com os compostos (-)-Guaiol, AF1 e AF2. Resultados demonstram que AF2 e 1,8-cineol na concentração de 50 µM diminuíram a atividade fagocítica da linhagem canina DH82 após incubação com formas promastigotas. Em células RAW 264.7 estimuladas com LPS os tratamentos com os compostos aumentaram a produção de óxido nítrico (NO). Já em DH82 é possível observar a diminuição da produção de NO em células não estimuladas e tratadas com (-)-Guaiol diferente do tratamento com AF2 e 1,8-cineol que aumentaram em relação ao controle. A linhagem murina P388D1 estimulada com LPS, mostrou que os tratamentos com (-)-Guaiol e 1,8-cineol diminuíram a produção de NO, enquanto AF2 levou a um aumento de NO. A produção de ROS em culturas RAW 264.7 sem estímulos e tratadas com AF1, AF2 e 1,8-cineol aumentaram a produção de ROS em relação ao controle. Em culturas RAW 264.7 estimuladas com LPS, a produção de ROS diminuiu após tratamento com AF2. Na linhagem murina P388D1 estimulada com LPS, o tratamento com (-)-Guaiol e AF1 diminuíram a produção de ROS. A linhagem DH82 diminuiu sua produção de ROS no tratamento com AF1 e aumentaram com AF2. Em células estimuladas, o tratamento com AF1 e 1,8-cineol levou a uma diminuição, enquanto com (-)-Guaiol houve aumento na produção de ROS. A análise da expressão de moléculas MHC e co-estomulatórias de macrófagos murinos RAW 264.7 estimulados ou não com LPS+INF-γ e tratados não demonstram alteração na expressão de moléculas MHC II, CD80 e CD86. Resultados preliminares demonstram que os compostos aparentam levar a uma diminuição na expressão de MHC II em linhagem canina DH82 não estimulada e estimulada com LPS. Na linhagem P388D1 houve uma diminuição na população de células MHC I + tratadas com 60 µM de AF2 e AF2+LPS e um aumento na população de células MHC II+ tratadas com AF2, AF2+LPS e infectadas com L.a e tratadas com AF2. Por fim, resultados de PCR em tempo real demonstram que macrófagos murinos RAW 264.7 e caninos DH82 aumentaram a expressão de mRNA da citocina IL-10 após tratamento com (-)-Guaiol, AF1 e 1,8-cineol. A expressão de IL-10, IL-12, TLR4 e TLR9 em células RAW 264.7 e DH82 diminuíram após o tratamento com os compostos. A linhagem P388D1 em repouso e tratadas com (-)-Guaiol e AF1 levaram a uma redução da expressão de TLR4 nas células. Os resultados sugerem que o efeito dos compostos pode ser diferente dependendo do tipo celular e que modulam a produção de NO, ROS e a expressão de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias assim como alteram a expressão de moléculas MHC e receptores semelhantes a Toll (TLR) nas células.

Durante os últimos 20 anos, pesquisadores brasileiros, desempenharam um papel de liderança nos esforços para melhorar o nosso conhecimento da bioecologia, a presença de patógenos e a dinâmica das populações de carrapatos associados com animais silvestres na América do Sul. Muito destes achados foram fornecidos na forma de dados moleculares, principalmente sequenciamento de marcadores moleculares amplificados usando a técnica da “polymerase chain reaction” (PCR). No entanto, apesar dos avanços conseguidos até o momento, ainda existe uma série de barreiras que impedem que as técnicas moleculares se tornem a abordagem padrão para a identificação de carrapatos associados a animais silvestres no Brasil. Pesquisas elaboradas no PPGCV/UFRRJ por nosso grupo, entre 2018-2019, resultaram no desenvolvimento de um sistema robusto e de baixo custo (que serve como uma alternativa ao sequenciamento) para a identificação, em nível de espécie, de carrapatos da família Ixodidae. O sistema é baseado na técnica de Reação em Cadeia da Polimerase-Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restrição (“Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism” = PCR-RFLP), utilizando um fragmento do gene mitocondrial que codifica o RNA ribossômico 16S como alvo.  Para facilitar o acesso a esse sistema e promover seu uso por outros pesquisadores brasileiros, foi desenvolvida uma ferramenta “on-line” denominada “TickCutter”. O presente projeto visou expandir e aperfeiçoar esta ferramenta em duas frentes. Em primeiro lugar, uma nova ferramenta denominada “COIsearcher” foi desenvolvida usando um marcador molecular alternativa, especificamente Citocromo C Oxidase I (COI), com o intuito de resolver algumas das limitações associadas com o uso de um único marcador molecular.  Em segundo lugar através da inclusão de dados de PCR-RFLP (padrões de bandas determinados através de digestão in sílico de “amplicons” virtuais (~460 nucleotídeos) do gene 16S rDNA com as enzimas DraI e VspI), oriundos de espécies de carrapatos da família Argasidae ou provenientes de novos representantes da família Ixodidae. Um total de 35 novos padrões de bandas foram identificados entre 363 sequências inéditas de 16S rDNA procedentes de carrapatos da família Ixodidae (depositadas no GenBank entre as datas 06/09/2019 até 08/03/2021. A inclusão destes dados aumentou o número de espécies identificadas pela ferramenta.  Em relação aos carrapatos da família Argasidae, foram identificados 31 perfis de bandas entre as 75 sequências obtidas do GenBank (os quais representaram 22/25 das espécies de Argasídeos reconhecidos no Brasil).  No entanto, sete padrões procedentes de seis espécies (Antricola guglielmonei, Ornithodoros capensis, Ornithodoros guaporensis, Ornithodoros kohlsi, Ornithodoros marinkellei e Ornithodoros mimon) geraram identificações conflitantes com perfis derivados dos seguintes carrapatos da família Ixodidae: Amblyomma coelebs, A. geayi, A. tigrinum, Dermacentor nitens, Haemaphysalis leporispalustris, Ixodes auritulus e Rhipicephalus microplus. A nova ferramenta “COIsearcher” foi desenvolvida de modo bastante semelhante a ferramenta “TickCutter 16S” e aproveitou de algumas das soluções elaboradas para a resolução de problemas encontrados durante o desenvolvimento do módulo 16S. No entanto, algumas modificações foram necessárias devido as diferenças entre os marcadores, particularmente em termos do tamanho dos “amplicons”. O banco de dados do novo modulo foi estabelecido com base na digestão in sílico de “amplicons” virtuais (709 nucleotídeos) do gene COI com as enzimas AluI e MboI, oriundos de espécies de carrapatos da família Ixodidae.  Um total de 65 perfis de bandas foram registrados entre um total de 281 sequencias procedentes de 27 das 33 espécies do gênero Amblyomma. Além disso, 23 padrões de bandas adicionais foram identificados a partir de 570 sequencias depositados para as espécies Dermacentor nitens, Haemaphysalis juxtakochi, Haemaphysalis leporispalustris, I. auritulus, R. microplus e R. sanguineus. O poder de discriminação interespecífica da ferramenta “COIsearcher” foi alto. Porém foram detectadas algumas identificações conflitantes, de modo similar ao notado anteriormente com a ferramenta “TickCutter 16S”. A solução encontrada para resolver estes conflitos foi a identificação de uma terceira enzima capaz de gerar padrões discriminatórios em nível de espécies. A aplicação desta estratégia permitiu a identificação diferencial de 86/88 dos padrões de bandas dentro do banco de dados de “COIsearcher”, um resultado considerado como altamente satisfatório. As modificações introduzidas na plataforma “TickCutter” fornecerão maior flexibilidade e poder discriminatório ao sistema de identificação atual e oferecerá uma solução para a maioria das limitações associadas ao uso de um único marcador molecular.

O nematoide Caenorhabditis elegans vem sendo utilizado como modelo experimental de estudos em diversos setores da biologia e medicina em função dos baixos custos econômicos para manutenção, cultivo e execução de experimentos. A utilização da técnica de criopreservação para esta espécie pode gerar uma fonte de tecidos e células vivas geneticamente estáveis para uma variedade de propósitos. Atualmente as técnicas de preservação padrão para C. elegans tem demonstrado dificuldades para obter resultados com elevados índices de sucesso nas taxas de sobrevivência. Desta forma, se faz necessário o constante desenvolvimento de novas técnicas e testes de novas substâncias que possam garantir maior viabilidade e estabilidade na conservação das culturas. O presente estudo buscou definir uma metodologia de criopreservação utilizando diferentes substâncias e associações com o objetivo de aprimorar manutenção e transporte da cultura de C.elegans. Foram considerados três fatores determinantes para sobrevivência e capacidade de manutenção de cultura de C. elegans durante o congelamento e descongelamento, sendo eles o uso de um agente conservante, a associação a um agente gelante e o tempo de armazenamento em nitrogênio líquido, utilizando o congelamento em duas etapas. O uso de glicerol e polivinilpirrolidona (PVP) demonstraram resultados satisfatórios na associação de agentes gelantes como ágar, carbopol e carboximetilcelulose (CMC), respectivamente. O Polietilenoglicol (PEG) e o polissorbato 80 (T80) comparados as demais substâncias testadas, não obtiveram eficiência significativa, apesar de confirmar seu caracter crioprotetivo entre as repetições. Não foram demonstrados resultados comprobatórios que estes componentes avaliados individualmente trouxeram benefícios a criopreservação de C. elegans. Considerando os desdobramentos dos fatores entre si para a sobrevivência de C. elegans, foi identificado que a manutenção de indivíduos vivos após o descongelamento a partir de sete dias de armazenamento é essencialmente dependente da utilização de conservantes associados a algum tipo de agente gelante.

O objetivo do presente estudo foi realizar uma análise epidemiológica a partir da detecção de Anaplasma platys através da técnica de PCR em Tempo Real – conhecida também como qPCR – em amostras de sangue de cães domiciliados em municípios da região serrana e regiões de baixa altitude situadas no Estado do Rio de Janeiro. Após a detecção, as amostras positivas foram submetidas a análises estatísticas com o intuito de verificar a associação de fatores epidemiológicos com a presença do DNA de A. platys no sangue de cães provenientes dessas regiões, bem como elaborar modelos estatísticos que podem predizer variáveis relacionadas à infecção por A. platys. Foram coletadas amostras de 456 cães provenientes de quatro municípios de diferentes regiões do Estado – Petrópolis e Teresópolis, situados na região serrana – e Barra do Piraí e Paracambi – localizados na região sul Fluminense e região metropolitana, respectivamente. A partir da coleta de sangue, o material genético foi extraído e submetido à detecção de um fragmento específico do gene gltA, por meio da aplicação da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase – variação quantitativa (qPCR). Um Questionário Epidemiológico foi elaborado e aplicado aos proprietários dos cães, abordando fatores que pudessem estar associados à ocorrência da infecção por Anaplasma platys nos animais das regiões selecionadas para o estudo. Foram analisados fatores como sexo, raça, escore, porte, comprimento do pêlo, idade, altitude, zona, período climático, região do domicílio, estado sanitário do animal, número de cães no domicílio, presença de gatos, presença de outros animais domésticos, presença de roedores, presença de animais silvestres, presença de bovinos, presença de vegetação, acesso à rua, uso de parasiticidas, presença de quintal, assistência veterinária, avaliação de saúde, habitação, castração, infestação por pulgas, infestação por carrapatos da espécie Rhipicephalus sanguineus, infestação por carrapatos do gênero Amblyomma. Das 456 amostras testadas por qPCR, 6,14% foram consideradas positivas para Anaplasma platys. Dentre os 28 animais em que A. platys foi detectado, 28,6% pertenciam a Petrópolis e 14,3% a Teresópolis – totalizando 42,9% de casos na região serrana – enquanto 39,3% pertenciam a Paracambi e 17,8% a Barra do Piraí – municípios de baixa altitude, representando 57,1% de ocorrências nas regiões em questão. Ao analisar as variáveis submetidas à Regressão Logística observou-se que cães residentes em regiões de baixa altitude têm 3,08 vezes mais chances de estarem infectados por A. platys do que animais domiciliados na região serrana. Quanto ao número de cães no domicílio, constatou-se que, em residências que possuem mais de um cão, esses animais apresentam 3,40 vezes mais chances de estarem infectados por A. platys do que um único cão em uma residência. Tal estudo demonstrou que altitude e número de cães no domicílio são fatores epidemiológicos de relevância e interesse nos estudos associados à infecção de cães por A. platys nos municípios de Petrópolis e Teresópolis – região serrana – e Paracambi e Barra do Piraí – regiões de baixa altitude.

A produtividade da pecuária pode ser significativamente diminuída pelos efeitos do parasistismo gastrointestinal. Assim como, pode impactar cães e gatos e, consequentemente, seres humanos devido ao potencial zoonótico. A necessidade de alimentos sem resíduos de pesticidas, melhores condições de trabalho e aumento de casos de resistência anti-helmíntica abre um caminho para alternativas sustentáveis no controle de helmintíases, como os óleos essenciais. Neste contexto, Caenorhabditis elegans é utilizado para pesquisar fitoinsumos com atividade anti-helmíntica em diversos estágios de desenvolvimento através da avaliação toxicológica em diferentes cepas de C. elegans. O objetivo do presente estudo foi avaliar as atividades de oleos essencias frente ao C.elegans e desta forma avaliar seu potencial para uso como um produto anti-helmíntico. Os seguintes OEs foram utilizados: Cymbopogon flexuosus, Eugenia caryophyllus, Illicium verum, Mentha piperita, Mentha spicata, Pelargonium graveolens e Thymus vulgaris. Estes foram solubilizados em DMSO. Foram realizados testes in vitro de letalidade em adultos de cepa selvagem (N2) e cepas resistentes à ivermectina, albendazol e levamisol, eclodibilidade de ovos e postura de ovos. O óleo essencial de Illicium verum apresentou melhor atividade nematicida em adultos N2 e inibição de postura de ovos. Já o óleo essencial de Pelargonium graveolens exibiu melhor inibição de eclodibilidade de ovos. De modo geral, em comparação com a cepa N2, os óleos essenciais de I. verum, P. graveolens e de T. vulgaris apresentaram sensibilidade em graus diferentes de concentrações. Entretanto, em cepas resistentes à ivermectina e sob exposição a altas concentrações na cepa resistente ao levamisol, o óleo essencial de P. graveolens não exibiu eficácia.

As pulgas são ectoparasitos hematófagos que realizam repasto sanguíneo em animais de sangue quente. Possuem grande importância em parasitologia sendo vetores de diferentes agentes etiológicos capazes de causar doenças em diversos hospedeiros vertebrados. O uso de nematoides entomopatogênicos (NEPs) vêm sendo estudado como alternativa no controle biológico de artrópodes, na tentativa de reduzir por exemplo a contaminação ambiental e a resistência a substâncias químicas. O presente estudo tem como objetivo avaliar a suscetibilidade e mortalidade de larvas de sete dias de Ctenocephalides felis felis por nematoides entomopatogênicos da espécie Heterorhabditis amazonensis, linhagem NEPET11, em condições experimentais distintas. O experimento realizado foi dividido em duas etapas, onde na primeira foram utilizadas 70 larvas de sete dias de C. felis felis, divididas em sete placas, sendo, seis delas expostas a solução contendo os NEPs e um controle. As placas submetidas a infecção continham 10 larvas de pulga e 600 μL de solução com juvenis infectantes (JIs) de nematoides entomopatogênicos (120 NEPs/larva), já o controle continha 10 larvas de pulgas e 600 μL de água destilada, ambos foram mantidos em câmara climatizada a uma temperatura de 25±1ºC, 70-80UR, sendo observadas por um período de 48 horas para avaliar a mortalidade das larvas. A confirmação da infecção se deu através da disecção de uma larva de pulga de cada placa e a observação da presença de juvenis e/ou adultos no seu interior. Na segunda etapa foram utilizadas 10 placas contendo larvas de sete dias de C. felis felis infectadas por JIs de H. amazonensis NEPET11 na concentração de 120 JIs/larva de pulga. Cinco placas foram mantidas em BOD a temperatura de 25±1°C, 70-80UR e as outras cinco mantidas em temperatura ambiente. Além destas, havia duas placas controle contendo 10 larvas de pulgas e 600 μL de água destilada, mantidas sob as mesmas condições.  A porcentagem de mortalidade das larvas de pulga foi avaliada pela análise de variância (ANOVA), seguida do teste de Tukey com nível de significância de 5% (p≤0,05) através do programa estatístico SISVAR. Na primeira etapa experimental foi possível constatar a infecção das larvas de pulga por H. amazonensis, sendo obtido um percentual médio de mortalidade igual a 98,33%. Na segunda etapa experimental, a infecção também obteve sucesso nas duas condições testadas. O percentual médio de mortalidade após 48 horas de observação foi de 96% para as placas mantidas em BOD e 98% para as mantidas em condições ambiente, sem apresentar diferença significativa entre elas. Em ambas as etapas não foi possível a recuperação dos juvenis infectantes em armadilha de White. O presente estudo sugere que as larvas de pulga C. felis felis são susceptíveis a infecção por H. amazonensis NEPET11, e que o NEP possui uma elevada virulência para o estágio do ciclo biológico avaliado desta espécie de pulga, sendo eficiente quando utilizados em condições experimentais. Os NEPs podem ser uma ferramenta promissora para o controle biológico de pulgas, porém, mais estudos devem ser realizados utilizando tanto a espécie hospedeira quanto a espécie de nematoide, já que este foi o primeiro estudo avaliando a infecção de larvas de C. felis felis por H. amazonensis.

O surgimento e a disseminação da resistência aos antimicrobianos é uma das três principais ameaças à Saúde Pública no século XXI, e deve ser analisado em uma abordagem integrada de Saúde Única, por se tratar de um risco à saúde compartilhado por pessoas, animais e meio ambiente. Apesar da compreensão a respeito da origem multifatorial da resistência antimicrobiana, pouco se sabe sobre a contribuição dos ambientes voltados a produção, manutenção e cuidados de animais na disseminação desse fenômeno. Dentre estes, o espaço de necropsia representa um ponto de coesão, sendo um local de extrema relevância para pesquisa e compreensão da circulação da microbiota bacteriana e seus genes de resistência. O presente estudo avaliou a ocorrência de superbactérias em amostras de animais necropsiados na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, considerando os critérios de prioridade estabelecidos pela Organização Mundial de Saúde (OMS),  onde Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii resistentes aos carbapenêmicos e bactérias da ordem Enterobacterales resistentes aos carbapenêmicos e produtoras de ESBL foram classificadas como nível 1 ou críticas; Enterococcus faecium resistente à vancomicina, Staphylococcus aureus meticilina-resistente e com resistência ou resistência intermediária à vancomicina e Salmonella spp. resistente às fluoroquinolonas como nível 2 ou alta prioridade; e, Shigella resistente às fluoroquinolonas e S. pneumoniae não suscetível à penicilina como nível 3 ou média prioridade. Das 198 amostras coletadas de 45 animais, sendo 20 animais de companhia, 20 de produção e 3 selvagens, foram isoladas 325 cepas, das quais 51,38% (167/325) foram Enterobacterales, 31,69% (103/325) Staphylococcus spp., 12,62% (41/325) Enterococcus spp., 2,46% (8/325) Streptococcus spp. e 1,85% (6/325) BGNNF. O MALDI-TOF mostrou-se uma ferramenta eficiente para identificação bacteriana, principalmente em Enterococcus spp. e Enterobacterales. A concordância entre as técnicas bioquímica, proteômica e genotípica na identificação de Staphylococcus spp. foi de 80,58%, o que confirma a importância da associação entre diferentes métodos diagnósticos para a caracterização nesse gênero, levando ao direcionamento correto da análise de resistência. 8,74% (9/103) dos Staphylococcus spp. apresentaram resistência fenotípica indicativa de produção de PBP2a, com detecção do gene mecA em todas as cepas. Em 29,13% (30/103) dos Staphylococcus spp. houve detecção do gene blaZ. Foi evidenciada resistência fenotípica à vancomicina em E. faecalis, com detecção do gene vanB. A pesquisa fenotípica de ESBL foi realizada através de antibiogramas de triagem e confirmatório, preconizado pelo CLSI. 11,98% (20/167) das enterobactérias apresentaram resistência aos beta-lactâmicos no antibiograma de triagem e 80% (16/20) delas foi positiva no teste confirmatório. A pesquisa dos genes que codificam ESBL revelou a presença de bla_SHV em 10,18% (17/167), bla_TEM em 6,59% (11/167) e bla_CTX-M em 4,19% (7/167). Não houve detecção de cepas produtoras de carbapenemases. Não foram detectados genes mcr. Esses resultados revelam a ocorrência de espécies caracterizadas como superbactérias críticas pela OMS em ambiente de necropsia e reforçam a necessidade de monitoramento dessas cepas no ambiente veterinário não apenas para a adoção de medidas de controle e tratamento adequados dos animais, mas também para a implementação de protocolos seguros para o descarte de suas carcaças.

As pulgas estão entre os ectoparasitos que mais acometem os animais de companhia. Elas produzem e transmitem doenças que representam um perigo para a saúde dos animais e humanos. O controle desses insetos envolve o uso de inseticidas. Os disruptores de desenvolvimento de insetos são um grupo de inseticidas que pode atuar como alternativa no controle de pulgas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade do novaluron e do piriproxifen sobre as larvas de Ctenocephalides felis felis em testes in vitro na interrupção do ciclo, determinando a concentração letal (CL) dos dois compostos. Inicialmente foi avaliado o método de impregnação de substrato larval a ser utilizado no experimento. Para isso foi preparada uma solução de piriproxifen a 400 ppm e utilizado um volume de impregnação de 200 µL para dois gramas de substrato. O resultado foi satisfatório, sendo que a metodologia não interferiu no resultado, havendo 100 % de inibição do ciclo de desenvolvimento da pulga e não houve interferência no desenvolvimento do ciclo para o controle. Para a execução do experimento com os disruptores, foi empregada a metodologia anteriormente citada. Diferentes concentrações de piriproxifen (0,049 a 25 ppm) e de novaluron (0,001 a 5,0 ppm) foram preparadas. Após a impregnação do substrato, as larvas de primeiro ínstar foram expostas ao substrato larval tratado. O material foi mantido em condições controladas por um período de 21 dias. Foram realizadas avaliações qualitativas, quantitativas e foi determinada as concentrações letais através da análise de Probit. Na avaliação do teste com piriproxifen foi constatada uma eficácia de 100% nas concentrações superiores a 1,563 ppm. Dos pupários foram recuperadas pulgas vivas e mortas, as mortas apresentavam alterações na morfologia, na coloração e no tamanho. Observou-se que existiu uma diferença significativa entre a quantidade de pulgas vivas recuperadas do grupo controle e os tratados, além de uma maior quantidade de fêmeas comparada aos machos. O cálculo de concentração letal CL₅₀ e CL₉₀ do piriproxifen foi de 0,07 e 0,27 ppm, respectivamente. No teste de novaluron houve 100% de eficácia na maior concentração (5,0 ppm). Dos pupários foram recuperadas algumas pulgas mortas, elas apresentavam alterações no exoesqueleto, na coloração e nos membros, porém sem alterações visíveis no tamanho. A quantidade de pulgas vivas recuperadas foi descontínua entre as concentrações, o controle teve uma diferença significativa com os tratados a partir da concentração 1,0 ppm. Com relação ao sexo, maioritariamente eram fêmeas, exceto na concentração 1,75 ppm. A concentração letal calculada CL₅₀ e CL₉₀ do novaluron foi de 0,25 e 2,29 ppm, respectivamente. Baseando-se nos resultados deste trabalho, pode se afirmar que tanto piriproxifen como novaluron demonstraram ter atividade sobre as larvas de Ctenocephalides felis felis, interrompendo o ciclo de desenvolvimento do inseto. Além disso, o novaluron foi avaliado pela primeira vez em uma população laboratorial de pulgas no Brasil, demonstrando ser uma alternativa para o seu controle.

Os hemoparasitos são responsáveis por causar grandes danos para a saúde dos animais, sejam eles de produção, companhia ou de ambiente silvestre. Muitos agentes patogênicos possuem potencial zoonótico e representam um tópico importante em saúde pública. Neste sentido, o objetivo do presente estudo foi detectar a infecção por bactérias da família Anaplasmataceae em animais silvestres de vida livre resgatados e conduzidos à Clínica de Reabilitação de Animais Silvestres (CRAS) da Universidade Estácio de Sá, município do Rio de Janeiro, estado do Rio de Janeiro, Brasil. Foram coletadas amostras de sangue de 148 aves, 52 mamíferos e 20 répteis, totalizando 220 animais, no período entre janeiro de 2019 a agosto de 2021. As amostras foram devidamente identificadas e acondicionadas para posterior processamento no Laboratório de Cultivo de Células e Hemoparasitos da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ), onde foram submetidas à extração de DNA. As amostras foram submetidas às técnicas de nested-PCR e PCR convencional para a detecção de DNA alvo correspondente aos genes 16S rDNA, gltA e GroEL de Anaplasmataceae, bem como alvos específicos para os gêneros Anaplasma spp. (16 rDNA e rpoB) e Ehrlichia spp. (Dsb). Após todos os ensaios, o DNA de Anaplasma sp. foi detectado apenas em um espécime de Coendou spinosus através de amplificação dos genes 16S rDNA e GroEL. No sequenciamento dos produtos amplificados, a espécie de Anaplasma sp. detectada apresentou a identidade de 99,4% com Anaplasma sp. (830/835) descrito em dromedário no gene 16S rDNA e 81,11% com Anaplasma platys no gene GroEL. Desta forma, demonstra-se que animais silvestres estão susceptíveis à infecção por agente da família Anaplasmataceae, e podem atuar como reservatório e mantenedores do ciclo epidemiológico de importantes patógenos para saúde animal e humana.

O presente estudo avaliou a compatibilidade entre os isolados de Beauveria bassiana (LCM S19 e LCM S20) e Metarhizium anisopliae (LCM S01) com o óleo essencial de Illicium verum, a eficácia dos isolados e do óleo separadamente no controle de larvas, pupas e adultos de Aedes aegypti e ainda, a análise in silico do óleo. Para compatibilidade entre os fungos e óleo, foi avaliada a germinação dos isolados e o crescimento do diâmetro de colônia. Para o percentual de germinação, 10 μL de suspensão fúngica associada ou não ao óleo foram inoculadas em placas contendo BDA + cloranfenicol a 0,5%. Após 16 horas de incubação o percentual de germinação foi verificado. Para avaliação do crescimento radial de colônia, 10 μL de cada suspensão foram inoculadas no centro de placas contendo meio de Aveia e mensurados durante 9 dias. Para a atividade larvicida e pupicida, grupos contendo 10 larvas ou pupas de A. aegypti foram mantidos em copos descartáveis contendo 15 mL de solução de óleo essencial a 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm e 100 ppm ou suspensão fúngica nas concentrações de 104, 105, 106, 107 e 108 propágulo/mL. A sobrevivência de larvas e pupas foi monitorada diariamente. No ensaio biológico com adultos, 10 mosquitos, foram transferidos para copos descartáveis contendo papel filtro, previamente impregnados com 1mL das concentrações do óleo essencial ou as concentrações fúngicas, cobrindo toda a superfície interna do copo. O grupo controle de todos os experimentos continha água desclorada com Tween 80 a 0,03%. Os dados foram submetidos ao teste de normalidade, e após submetidos à Análise de Variância usando o teste de Tukey. Os testes de Kaplan-Meier e Log-rank foram usados para análise da curva de sobrevivência e o tempo médio de sobrevivência (S50). O nível de significância foi de 95% (P≤0,05). As concentrações de I. verum OE não interferiram na germinação dos conídios bem como não causaram alteração no crescimento da colônia dos isolados LCM S01 (Metarhizium anisopliae), LCM S19 e LCM S20 (Beauveria bassiana). No ensaio biológico com o O.E., o mesmo demonstrou atividade larvicida para todas as concentrações estudadas e atividade pupicida nas concentrações de 60 e 100 ppm. A análise in silico mostrou que 79,96% do óleo é composto por (E)-anethole que pode afetar 89 possíveis alvos no artrópode. No ensaio biológico com os isolados fúngicos, todos, independentemente do propágulo utilizado, foram capazes de reduzir a taxa de sobrevivência das larvas na concentração 108 propágulo/mL. A atividade pupicida, ficou demonstrada por todos os isolados em concentrações diversas. O isolado LCM S01, foi capaz de reduzir a sobrevivência dos adultos em três concentrações diferentes. Os isolados LCM S19 e LCM S20 também foram virulentos nas maiores concentrações para os adultos. Conclui-se que os isolados fúngicos e o óleo essencial são compatíveis e boas opções para controle de larvas, pupas e adultos de A. aegypti.

A dopamina (DA) é uma monoamina biogênica que modula os hemócitos de carrapatos e insetos relacionados ao sistema imunológico desses artrópodes. No entanto, o papel detalhado da DA na resposta imune dos carrapatos ainda não foi elucidado. O presente estudo analisou o efeito de um antagonista do receptor DA em carrapatos desafiados com o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae. Nosso estudo avaliou a sobrevivência e os parâmetros biológicos de Rhipicephalus microplus, a atividade fenoloxidase de sua hemolinfa, o índice fagocítico dos hemócitos, detecção de DA nos hemócitos e quantificação de hemócitos. Sete grupos foram formados da seguinte forma: grupo controle com carrapatos sem inoculação (CTR), carrapatos inoculados com tampão fosfato (PBS), inoculados com apenas com antagonista 1ɳM (SCH A), 1μM (SCH B), conídios de M. anisopliae (MA) e associações (SCH A + MA e SCH B + MA). Houve redução na sobrevida comparando as médias de MA (7 dias), com SCH A + MA (5 dias e meio; P=0,0253) e SCH B + MA (4 dias e meio; P=0,0291). O índice de produção de ovos (IPO) foi menor no grupo SCH A + MA (9,6%) e SCH B + MA (8,9%) comparado ao CTR (49,7%; P<0,0001) e com MA (25,1%) (P=0,0098 ; P=<0,01). O índice fagocitário observado em carrapatos tratados apenas com Metarhizium foi de 57,3% em contraste com 18,1% (SCH A+MA) (P<0,0001) e 25,3% (SCH B+MA) (P<0,0001). Não foram detectadas alterações na atividade da fenoloxidase e nos níveis de DA em hemocitos de R. microplus na presença do antagonista. A quantificação de hemócitos tratados com antagonista associado ou não ao fungo foi semelhante. Este resultado corrobora com a hipótese de que o DA é crucial no processo de defesa do carrapato, alterando a capacidade fagocitária dos hemócitos e a suscetibilidade dos carrapatos à infecção por fungos entomopatogênicos.

O trabalho em tela investigou a interação entre cães domésticos e as áreas florestadas do entorno da Área de Proteção Ambiental Palmares (APA Palmares), uma comunidade inserida na Floresta Atlântica no Estado do Rio de Janeiro. A área da APA situa-se em altitudes variando de 831 a 985 metros acima do nível do mar. Os cães foram classificados em três categorias, domiciliados, semidomiciliados e errantes. Observou-se que os cães domiciliados, embora mantidos em quintais cercados, entram em contato com alguns animais silvestres os quais visitam as residências, provavelmente a procura de alimentos ou mesmo abrigo como caso de gambás e ouriços. Os cães semidomiciliados e errantes visitam frequentemente a área de floresta situada próxima às residências, portanto estão em contato com animais silvestres. Segundo informações dos tutores, alguns cães são tratados com diferentes ectoparasiticidas, sempre que os tutores detectam infestações por ectoparasitas. Os cães foram examinados como animais sentinelas para diagnosticar a presença de carrapatos parasitos comuns de animais silvestres. As coletas de carrapatos ocorreram mensalmente de janeiro a dezembro de 2019. Foram diagnosticados 60 (33,9%) cães positivos entre os 177 cães examinados. Três espécies de carrapatos foram identificadas: Rhipicephalus sanguineus, Amblyomma aureolatum e Amblyomma ovale. Foram coletados 279 carrapatos adultos, assim distribuídos: 143 (51,3 %) R.sanguineus, 135 (48,4 %) A. aureolatum e uma única fêmea de A. ovale. A interação carrapato/cão foi avaliada em termos de habitação, tratamento e sexo do hospedeiro pelo teste de Qui quadrado para R.sanguineus e A. aureolatum. O resultado do Qui quadrado indicou dependência de ambas espécies para os itens habitação e sexo e independência para o item tratamento.

Comumente observa-se ocorrência de dermatopatias em coelhos ocasionadas por ectoparasitos, principalmente Psoroptes ovis e Leporacarus gibbus, responsáveis por desenvolverem quadros de otite externa e presença de pontos enegrecidos no pelame, respectivamente. Apesar de vários tratamentos já serem descritos para o controle de parasitos em coelhos, novos compostos e vias de administração são objetivos de estudos, com o intuito de desenvolver produtos mais seguros e mais práticos para a utilização. Contudo, o presente estudo objetivou avaliar a eficácia de um grupo de moléculas, as isoxazolinas (afoxolaner, fluralaner, lotilaner e sarolaner), no controle da sarna psoróptica e infestação por L. gibbus em coelhos naturalmente infestados. Para determinar a eficácia serão realizadas avaliações clínicas (determinadas pela escore das lesões: 1 a 4) e parasitológicas (através da avaliação de crostas e pelame: nos dias 0, +3, +7, +14, +21, +28 e +35). Um total de 36 coelhos infestados com ambos os ácaros serão utilizados ao longo do experimento. Divididos em 5 grupos experimentais e 1 grupo controle. Até o momento 2 grupos foram executados. Os animais foram avaliados clinicamente, quanto ao escore lesional e submetidos ao exame parasitológico nos dias 0, +3, +7, +21, +28 e +35 pós medicação, sendo que 1 grupo recebeu terapia a base de fluralaner na dose de 25mg/kg e outro grupo foi medicado com lotilaner na dose de 20mg/kg, ambos foram tratados por via oral em dose única, como recomendado pelo fabricante. O grupo controle foi submetido aos mesmos procedimentos de avaliação e exames, sendo utilizado medicação placebo. Assim, ocorrerá com todos os demais grupos a serem tratados. Aqueles tratados com fluralaner após 72 horas encontravam-se negativos no exame parasitológico para ambos os ácaros. Os coelhos tratados com lotilaner, após 72 horas, apenas 2 animais apresentaram ácaro vivo no exame parasitológico para P. ovis e 1 coelho positivo para L. gibbus. Em ambos os grupos não foram observadas reações clínicas adversas. Espera-se provar que essa nova classe possa ser utilizada em coelhos, sendo uma alternativa para o tratamento desses ácaros nessa espécie.

Ao longo das últimas décadas, múltiplos fatores como o estreitamento da relação entre humanos e animais de estimação, as mudanças ambientais decorrentes da urbanização de áreas periurbanas e rurais, a significativa intensificação da produção animal, acarretaram uma significativa mudança na dinâmica homem-animal com consequente aumento da circulação de patógenos bacterianos entre humanos e animais e a emergência e reemergência de doenças. A identificação de bactérias emergentes na rotina do diagnóstico veterinário tem se apresentado como um grande desafio, uma vez que, geralmente, estes patógenos não possuem estudos de referência a partir das amostras oriundas do ambiente animal, e por vezes, metodologias desenvolvidas para amostras de origem humana não se mostram efetivas para sua identificação. Outro aspecto associado a tal emergência é a circulação de genes de resistência apontando para a importância de caracterizar a resistência antimicrobiana de espécies bacterianas oriundas de diferentes ambientes animais. Neste trabalho foram caracterizadas espécies bacterianas e seu respectivo perfil de resistência oriundas de animais silvestres, produção avícola e amostras laboratoriais clínicas de diferentes espécies. Amostras oriundas de diferentes espécies de animais selvagens, como maritacas, jabutis, cachorro do mato e mão pelada, forneceram 103 isolados da família Enterobacterales, 28 Staphylococcus spp, 2 Streptococcus spp e 1 Enterococcus spp. Uma cepa de Pantoea dispersa isolada de maritaca foi detectada albergando o gene de resistência a colistina mcr-9. A partir das amostras de jabuti, foram detectadas 2 amostras apresentando o gene de resistência bla_TEM, 1 apresentou o gene bla_CTX e 1 apresentou ambos os genes. Dentre as amostras da produção avícola as cepas de Enteobacterales  revelaram 45,45% (20/44) de cepas produtoras de ESBL, sendo 35% (9/20) bla_SHV, 20% (4/20) bla_CTX-M, 15% (3/20) bla_TEM, 10% (2/20) apresentando os genes bla_SHV e bla_CTX, e 10% (2/20) apresentando bla_SHV e bla_TEM, simultaneamente. Dentre as 51 cepas de Enterococcus spp (51 cepas), 1 cepa de E. faecium oriunda de cloaca de pinto foi identificado o gene vanB e em 1 cepa de E. faecalis de frango adulto foram identificados vanA e vanB, simultaneamente. Destas mesmas 51 cepas 23,53% (12/51) apresentaram resistência a estreptomicina. Dentre as cepas de Staphylococcus spp. foi detectado 1 isolado com o gene mecA. A cama de maravalha utilizada pelos animais da avicultura também foi avaliada e foi detectado 01 amostra positiva para o gene bla_VIM.   As 35 amostras de Acinetobacter spp. foram identificadas por análise proteômica, genotípica e sequenciamento, para avaliar a diferença entre as técnicas foi utilizado o teste de Kappa entre MALDI-TOF e PCR, MALDI-TOF e rpoB, PCR e rpoB, e entre as três técnicas. O perfil de resistência dessas amostras também foi avaliado, sendo 54,28% (19/35) classificadas como MDR, 51,42% (18/35) apresentaram 01 ou mais genes de ESBL, sendo 04 cepas com gene bla_CTX, 01 cepa com bla_SHV, 09 cepas com bla_TEM, 03 cepas com bla_CTX e bla_TEM e 01 cepa com bla_SHV e bla_TEM. O presente trabalho buscou identificar bactérias e detectar genes de resistência em diferentes ambientes veterinários. Este é um grande desafio principalmente porque ainda há poucos trabalhos e ausência de padrões de análise fenotípica sobre temas animais. O papel do animal silvestre, de produção ou de companhia tem grande participação na disseminação do gene de resistência no ambiente, enfatizando a Saúde Única e gerando um alerta quanto ao foco de novos estudos para entender e avaliar ambientes veterinários.

Os flebotomíneos são os principais vetores da leishmaniose, doença zoonótica, negligenciada
de grande importância para a saúde pública, causada pelo protozoário do gênero Leishmania.
O objetivo deste estudo foi avaliar de forma robusta a dinâmica, a distribuição espacial, a
sazonalidade, a predileção alimentar e a taxa de infecção de flebotomíneos capturados em
Seropédica, no Rio de Janeiro. Foram realizadas coletas em cinco bairros do município: Valão
das Louças, São Miguel, Santa Sofia, Campo Lindo e Fazenda Caxias. Os flebotomíneos
foram capturados no período de Agosto de 2016 a Julho de 2018 e a quantidade de espécimes
foi correlacionada às variáveis climáticas (temperatura, umidade e precipitação), para o estudo
da sazonalidade. Os machos foram identificados por morfologia e as fêmeas foram
direcionadas para as análises moleculares. Para a realização das extrações de DNA das
fêmeas, foram testados quatro protocolos de extração: Fenolclorofórmio, HotShot, Salting out
e kit comercial Blood & Tissue QIAGEN®. Para a comparação dos dados, foi criada uma
escala de intensidade de amplificação obtida na PCR convencional, com alvo no gene
constitutivo coxI. As análises de identificação de fonte alimentar e taxa de infecção de
flebotomíneos por Leishmania spp. foram realizadas com todas as fêmeas alimentadas
capturadas. Para a identificação das fontes alimentares foi aplicada a técnica multiplex PCR
em tempo real com alvo no gene citocromo b de diversos animais. A determinação da taxa de
infecção dos flebotomíneos foi realizada pela técnica de PCR em tempo real com alvo no
gene mkDNA do protozoário. As espécies de flebotomíneos positivos foram identificadas por
sequenciamento genético pelo método de Sanger. Os dados de taxa de infecção e espécies de
flebotomíneos positivos foram interpolados com as coordenadas geográficas de cada ponto de
captura no software QGIS 3.14.15. As duas principais espécies identificadas por morfologia
foram Nyssomyia intermedia e Migonemyia migonei. Foi observada uma correlação positiva e
moderada entre a quantidade de flebotomíneos e as variáveis climáticas de temperatura e
índice pluviométrico. O protocolo de extração que apresentou maior custo benefício para
flebotomíneos foi o de fenolclorofórmio, com maior taxa de amplificação e menor média de
inibição. Do total de 360 fêmeas alimentadas, 6,11% apresentaram-se positivas para o gênero
Leishmania e de acordo com o sequenciamento genético, pertencentes às espécies N.
intermedia Nyssomyia whitmani e M. migonei. De acordo com a análise de detecção de fonte
alimentar, as três principais espécies de predileção dos flebotomíneos foram os humanos, as
galinhas e os cães. Segundo o mapa de Kernel, foi possível observar pontos positivos de
maior intensidade nas áreas rurais do município. De acordo com o estudo, foi possível
identificar que as áreas rurais apresentam maior risco de infecção para a doença e que as
principais espécies dos vetores relacionados à transmissão da LTA no Rio de Janeiro, então
presentes no município de Seropédica, com variação sazonal sob influência da temperatura e
precipitação, sendo fundamental a adoção de medida de controle, para prevenir, de forma
eficaz, o aparecimento de novos casos da doença na região

Theileria equi é um protozoário que infecta equinos, persiste por toda a vida do animal, e é desafiador para eliminar do organismo através do uso de medicamentos indicados para o tratamento da doença, ficando evidente que medidas preventivas são de suma importância na criação equina. O carrapato Rhipicephalus microplus é a única espécie de carrapato conhecida como vetor biológico de T. equi para equinos no Brasil, comprovado por estudos experimentais. A competência vetorial dos carrapatos está intimamente ligada à capacidade dos patógenos de escapar dos mecanismos de defesa do carrapato. Assim, entender as interações moleculares e celulares na interface carrapato-patógeno pode fornecer novos alvos para bloquear a transmissão de T. equi por R. microplus e outras vias metabólicas fundamentais para a infecção, multiplicação e persistência de T. equi no carrapato. Devido à falta de informações sobre os mecanismos envolvidos na interação carrapato-patógeno, o presente estudo teve como objetivo buscar maior conhecimento sobre: o perfil transcricional da glândula salivar de R. microplus em resposta à infecção por T. equi; e também a expressão diferencial dos participantes de vias de sinalização que atuam na defesa imunológica do intestino do carrapato quando desafiados com T. equi em condições experimentais. Os dados gerados contribuem significativamente para o avanço do conhecimento científico, pois fornecem informações genéticas e moleculares de alto valor tecnológico para exploração em muitos outros estudos para o parasito citado acima.

A clínica veterinária de pequenos animais desempenha importante papel no diagnóstico, tratamento, controle e profilaxia das principais enfermidades que acometem os cães. As hemoparasitoses representam a enfermidade parasitária mais comum, independente do sexo, idade e raça, sendo considerada endêmica no ambiente urbano. O primeiro capítulo teve como objetivo analisar os aspectos laboratoriais e epidemiológicos envolvidos na prevalência de hemoparasitos no ambiente urbano. Animais com trombocitopenia, monócitos ativados e anêmicos, foram os que apresentaram maior risco de estarem infectados por hemoparasitos, sendo que os aspectos relevantes foram o porte do animal e presença de carrapatos. O segundo capítulo apresentou como objetivo analisar a soroprevalência dos principias hemoparasitos endêmicos na clínica de pequenos animais em cinco clínicas veterinárias utilizando o método ELISA. Dos 1.132 exames selecionados, a soroprevalências de hemoparasitos foi de 44,3% para pelo menos um agente, sendo Ehrlichia spp. (33,3%), o gênero com maior prevalência, seguida de Dirofilaira immitis (7,1%), Anaplasma spp. (3,7%) e B. burgdorferi (0,3%). Em relação aos casos de coinfecções, a soroprevalência na população em estudo foi de 16,2% para pelo menos dois bioagentes analisados, sendo a maior soroprevalência de Ehrlichia spp. + Anaplasma spp. (7,9%), seguidos por Ehrlichia spp. + D. immitis (6,4%). O terceiro capítulo, objetivou avaliar a acurácia de três técnicas diagnósticas para os agentes, Ehrlichia spp. Anaplasma spp. e Babesia spp. na rotina da clínica de pequenos animais. Amostras de 70 cães domiciliados foram coletadas por conveniência e realizadas comparações entre animais positivos e negativos nos testes sorológicos e molecular, diante dos principais sinais e sintomas. Todos os animais incluídos, apresentavam pelo menos três sinais e sintomas clínicos e alterações laboratoriais sugestivas de hemoparasitose. As amostras de sangue foram analisadas por esfregaço, sorologia e qPCR. Foi realizado o cálculo de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo. A prevalência de Ehrlichia spp. foi de 40% e 37,1%, Anaplasma spp. 34,3% e 14,3% e Babesia spp. 8,6% e 14,3% no teste ELISA e qPCR respectivamente. O parasitismo geral dos tres agentes para as tres técnicas variou entre 1,43% a 82,86%. O teste ELISA apresentou a maior sensibilidade para o diagnóstico de Ehrlichia spp. (Se= 37,93%) e a menor sensibilidade para o diagnóstico de Anaplasma spp. (Se= 8,33%). O teste dot-ELISA apresentou a sensibilidade (Se=33,33%) e maior VPP (93,33%) para o diagnóstico de Babesia spp. Animais com epistaxe foram 100% positivos para Ehrlichia spp. no ELISA e 80% na PCR. A PCR Real time foi considerada a técnica fundamental para o diagnóstico de Ehrlichia spp. Anaplasma spp. e Babesia spp. sendo possível determinar selecionar animais com doença subclínica, aguda e crônica.