Toxoplasma gondii (T. gondii) é o agente causador da toxoplasmose. Este protozoário possui a característica de ser intracelular obrigatório e ter alta prevalência em todo o mundo, em que se acredita ter infectado um terço da população mundial, causando grande morbidade e mortalidade. Dada à complexidade desta doença, diversas pesquisas têm se dedicado ao estudo de estruturas que estejam associadas às doenças parasitárias. Dentre estas estruturas, estão as Junções Comunicantes que são responsáveis pela troca de íons e pequenos mensageiros que mantém a homeostase tecidual. Estes canais transmembranares exercem um importante papel na comunicação intercelular em diferentes tecidos, pois permitem a comunicação em diferentes tipos celulares, incluindo os macrófagos. Com isto, a caracterização morfológica e funcional das junções comunicantes em macrófagos, e em particular formada pela conexina 43 tem sido alvo de estudo de diversos grupos, mas seus mecanismos regulatórios ainda merecem esclarecimentos, principalmente diante de alterações patológicas, como nos processos infecto-inflamatórios causados pelo T. gondii. Diante disto, o objetivo principal deste estudo foi avaliar a modulação das junções comunicantes na linhagem macrofágica J774-G8, após a infecção com o parasito Toxoplasma gondii e a posterior ativação com fatores pró-imune inflamatórios. Como metodologia, foi utilizada: (1) Cultura de células J774-G8; (3) Infecção da cultura pelo do T. gondii cepa RH; (4) Tratamento com os fatores pró-imuno inflamatórios individuais e conjugados (IFN-γ, TNF-α, IFN-γ + TNF-α); (5) Ensaios imunoeletroforéticos (Western Blot); e (4) Ensaios de imunofluorescência e análise por microscopia confocal. Os resultados gerais achados foram: (1) A melhora no perfil morfológico das culturas de células J774-G8 infectadas com T. gondii tratadas com os fatores pró-imune-inflamatórios; (2) O aumento da expressão proteica da Cx43 em células J774-G8 infectadas após o tratamento com os fatores imunes pró-inflamatórios, por 24 e 48 horas; (3) A ativação celular estimulada pelo tratamento com fatores conjugados; (4) Os danos no citoesqueleto celular causados pela infecção foram irreversíveis, mesmo após o tratamento com os fatores pró-imune inflamatórios em células infectadas; (5) O dano ao citoesqueleto impediu o transporte e o ancoramento da Cx43 na membrana plasmática, porém os fatores proveram um aumento dos níveis citoplasmáticos da Cx43. Com isto foi possível concluir que: a infecção com o T. gondii causa danos irreversíveis nas células macrofágicas, porém o tratamento com fatores próimune inflamatórios estimula a produção da Cx43, que mesmo não conseguindo se inserir na membrana plasmática em células infectadas por conta dos danos no citoesqueleto, pode exercer papéis importantes no processo de manutenção da estrutura celular infectada.

Os analgésicos estão entre uma das classes de medicamentos mais utilizadas para o tratamento ou alívio de situações dolorosas e inflamatórias. Porém, devido ao grande número de efeitos colaterais e muitas vezes da ineficácia dessas drogas, se faz necessária a busca por novos fármacos. Quando um novo composto apresenta respostas promissoras, a conjugação de estruturas bioativas específicas em uma única molécula pode ser realizada através da hibridação molecular. Uma saída eficaz de planejar racionalmente novos fármacos que tenha ação sinérgica e/ou diminuição de efeitos adversos. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antinociceptiva aguda e crônica e anti-inflamatória do novo composto híbrido: (±-cis) (6-etil-tetraidro-2H-pirano-2-il)metil 2-(2-(2,6-diclorofenilamino) fenil acetato (LS26), sintetizado a partir da hibridação do composto [(±)-Cis)(6-etil-Tetrahidro-2H-Pirano-2-il]Metanol (LS20) e o anti-inflamatório não-esteroidal diclofenaco de sódio. O composto LS26 foi administrado pela via oral em todos os animais e em todos os modelos experimentais. De acordo com os resultados, o composto possui atividade antinociceptiva aguda observada nos modelos de contorções abdominais, formalina (ambas as fases) e imersão da cauda em água quente. O mecanismo de ação do composto envolve o sistema opioide, tendo em vista que a aplicação de antagonistas seletivos opioides foram capazes de reduzir o efeito antinociceptivo do composto híbrido. A via NO/GMPc/K⁺ATP também é um dos mecanismos de ação do LS26 devido a redução do efeito antinociptivo com a administração prévia de L-NAME, ODQ e glibenclamida. A atividade antinociceptiva aguda e crônica sobre a alodinia induzida pela constrição crônica do nervo ciático, também foi observada no modelo de dor neuropática devido a inibição da produção de IL-1β e IL-6 no nervo ciático. O composto não apresenta relação entre o efeito antinociceptivo e um déficit motor, de acordo com os resultados do teste de rota-rod. Quanto a atividade anti-inflamatória, o composto LS26 apresentou atividade anti-edematogênica, pois foi capaz de reduzir a migração leucocitária e a produção de citocinas pró-inflamatórias como IL-1β, TNF-α e IL-6 e aumentar a síntese da citocina anti-inflamatória IL-10 no modelo da bolsa de ar subcutânea. O composto apresentou seletividade para a inibição da COX-2 observada na avaliação in vitro. No teste toxicológico, o composto não apresentou alterações agudas e subcrônica nas avaliações microscópicas e macroscópicas. Esses resultados indicam atividade antinociceptiva através dos receptores opioides e a via NO/GMPc/K⁺ATP, além de atividade anti-inflamatória com inibição da migração leucocitária, redução dos níveis de IL-1β, TNF-α e IL-6, aumento de IL-10 e atividade inibitória seletiva sobre a COX-2.

Introdução: O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – Brasil (CAPES) – Código de Financiamento 001. A linhagem de animais espontaneamente hipertensos (SHR) é considerada como modelo de hipertensão essencial, sendo o modelo que mais se aproxima da hipertensão do ser humano. Essa linhagem até as 4 semanas de vida não apresenta hipertensão, o que torna interessante para estudar alterações fenotípicas que ocorrem nesse período de vida dos animais. Machos e fêmeas são diferentes em muitos aspectos fisiológicos. A reserva de sódio corporal pode ser armazenada em diversos tecidos, sendo a reserva da pele o interesse desse estudo e na linhagem SHR esse aspecto ainda não foi elucidado. Objetivos: Avaliar o status fisiológico das reservas ativa e inativa de sódio acumulado na pele em animais hipertensos e normotensos; avaliar as mudanças no padrão ingestivo dos animais fazendo uma relação com a pressão arterial e reserva de sódio; avaliar as diferenças entre machos e fêmeas em relação ao comportamento ingestivo, pressão, reserva de sódio e hormônios, avaliar as alterações nas concentrações hormonais antes e após o estabelecimento da hipertensão em animais de 4 semanas e 12 semanas de idade. Material e métodos: Foram utilizados animais SHR e Wistar, machos e fêmeas, com 4 semanas e 12 semanas de idade. Os animais foram obtidos do Biotério Central do Departamento de Ciências Fisiológicas da UFRRJ. Foram mantidos em condições-padrão de luz, temperatura e alimento. Foram realizados experimentos em gaiolas metabólicas, radioimunoensaio, o tail cuff para avaliações de pressão e análises do conteúdo de sódio e água da pele. Resultados: Protocolo 1. Na idade de 4 semanas machos SHR tomam mais sódio desde os 26 dias de idade e as fêmeas a partir dos 30 dias. Protocolo 2: Animais da linhagem SHR apresentaram menores índices ponderais em relação aos Wistar; houve diferenças de linhagem nos hormônios AVP, OT e ANG II nas 4 semanas e 12 semanas de idade em fêmeas, machos SHR e Wistar nas 4 semanas de idade não foram diferentes.  Protocolo 3: Animais espontaneamente hipertensos (SHR) não são hipertensos nas 4 semanas de idade e se tornam hipertensos na quinta semana de vida.  Protocolo 4. A reserva ativa ou inativa acumulada não se altera em função da linhagem em machos adultos ou filhotes, mas aumenta com o avanço da idade em machos e fêmeas. Discussão: Protocolo 1:Como era esperado animais SHR tomam mais salina hipertônica que os animais Wistar machos ou fêmeas. Protocolo 2: As diferenças hormonais na AVP  se devem às oscilações fisiológicas dos hormônios gonadais e a aumentada concentração plasmática de ANG II em SHR era esperada como característica da linhagem.  Protocolo 3: O aumento da pressão arterial média foi observado nos machos SHR a partir da 5ª semana de vida e das fêmeas a partir da 6ª semana de vida.  Protocolo 4. Em machos, a hipertensão não torna diferente a reserva de sódio acumulada em relação aos animais normotensos. Conclusões: Protocolo 1:A ingestão de sódio e água é influenciada pela linhagem e pelo dimorfismo sexual. Protocolo 2: A maioria das variações hormonais ocorreram devido às diferenças de linhagem. Protocolo 3: O estabelecimento da hipertensão está relacionado com a idade dos animais.   Protocolo 4. A hipertensão não muda a reserva osmoticamente ativa ou inativa em condições fisiológicas, mas sim a idade e o dimorfismo sexual exercem papéis importantes.

Uma alimentação materna inadequada está relacionada ao desenvolvimento de doenças e problemas de saúde, como obesidade e sobrepeso, doenças cardiovasculares e podem causar programação metabólica em sua descendência. Nosso grupo de pesquisa demonstrou anteriormente que o consumo materno de dieta hiperlipídica promoveu aumento da adiposidade e hiperleptinemia na prole de ratas ao desmame, além de prejuízo na função sistólica aos 30 dias de idade. Este estudo teve como objetivo investigar o efeito do consumo matermo de dieta hiperlipídica sobre a pressão arterial de ratos adultos e o possível envolvimento do íon sódio neste processo. Para isso, ratas Wistar receberam dieta controle (9% lipídeos, grupo C) ou hiperlipídica (29% lipídeos, grupo DH) durante 8 semanas antes do acasalamento, e durante a gestação e lactação. As progenitoras C e DH deram origem as proles controle (C) e hiperlipídica (DH), respectivamente. Após o desmame, parte da prole foi eutanasiada e o restante aos 180 dias de idade. No desmame foram avaliados: peso corporal, hipertrofia cardíaca, peso dos rins e tecidos adiposos brancos, concentração de sódio no sangue e pele e aos 180 dias foram avaliados: peso corporal, ingestão alimentar e hídrica, peso dos rins e coração, tecidos adiposos brancos, concentração de sódio no sangue, urina e pele. Na urina além do volume urinário foram analisados creatinina, K⁺, Cl^-, Ca⁺². Ao desmame a prole DH apresentou maior massa corporal, hipertrofia cardíaca, e apenas nos machos houve aumento de peso seco da pele e o conteúdo total de água da pele foi reduzido, assim como o sódio relativo da pele. Aos 180 dias de idade, não houve variação, entre as proles, da massa corporal, tecidos adiposos brancos, ingestão alimentar e hídrica, peso dos rins assim como na avaliação indireta de hipertrofia cardíaca. Os machos DH apresentaram pressão sistólica maior em relação aos machos CO assim como aumento do sódio plasmático, não havendo alteração do sódio urinário entre os grupos, nas análises bioquímicas somente no machos DH foi observado diminuição do eletrólito Cl^-. O conteúdo total de água da pele foi reduzido nos machos DH. Nenhuma dessas alterações foi detectada nas fêmeas. Quando avaliamos as concentrações de sódio nas amostras de urina e epitélio, não houve diferença. Nossos resultados demonstram que o consumo materno de dieta hiperlipídica promove aumento na concentração plasmática de sódio e da pressão sistólica na prole adulta de modo sexo-específico. Esses eventos podem estar relacionados com o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, como a hipertensão.

Transtornos de ansiedade e depressão estão entre os transtornos mentais de maior prevalência na população, afetando milhares de pessoas no mundo. A medicina popular, uma prática muito antiga, faz o uso de diversas plantas com a finalidade de se tratar doenças que acometem o homem. Com o passar dos anos houve um grande avanço nos estudos de plantas medicinais para se obter novos compostos com propriedades terapêuticas. Schinus molle L., planta pertencente à família Anacardiaceae, é popularmente conhecida como aroeira.  Além de apresentar ampla gama de atividades biológicas, seu extrato etanólico e hexânico demonstraram possuir efeito antidepressivo. O objetivo deste projeto foi avaliar as ações do tipo ansiolítica e antidepressiva do óleo essencial das folhas de Schinus molle L (OEFS) em modelos animais. No teste do campo aberto (CA), OEFS na concentração de 100mg/kg reduziu o número de quadrantes percorridos (OES100 = 19,1 ± 6,2 vs. CT = 71,4 ± 3,3) assim como o número de rearings (OES100 = 1 ± 0,5 vs. CT = 22,5 ± 10,5). No teste da barra giratória, o OESF não apresentou diferença significativa no tempo de permanência na barra e número de quedas. No teste do sono induzido por etomidato, OESF100 apresentou aumento no tempo de recuperação total do sono em relação ao grupo controle (OES100 = 162,2 ± 14,9 vs. CT = 97,4 ± 7,3 s). Para avaliar possível efeito ansiolítico, as doses de 25 e 50mg/kg de OEFS foram utilizadas no teste do labirinto em cruz elevado (LCE) e no teste de esconder esferas (TEE). No LCE, o OEFS não apresentou diferença significativa em nenhum dos parâmetros analisados (porcentagem de tempo nos braços abertos e porcentagem de entradas nos braços abertos). No TEE, OEFS não reduziu o número de esferas escondidas em relação ao grupo controle. Para avaliação de um possível efeito antidepressivo do OEFS, foi realizado o teste do nado forçado (NF). O OEFS não reduziu o tempo de imobilidade em nenhuma das doses testadas (25, e 50mg/kg). O pré-tratamento com flumazenil não foi capaz de reverter a redução da atividade locomotora e exploratória do animal no CA causada pelo OEFS100, demosntrando que o efeito depressor não é mediado pelo sítio benzodiazepínico do receptor GABAA. Estudos complementares são necessários para uma investigação mais aprofundada sobre seu efeito sedativo, assim como uma melhor exploração do perfil farmacológico desta planta.

A diminuição dos fluidos corporais pode ser ocasionada pela privação hídrica e com isso, mecanismos de controle e regulação são ativados de forma a garantir a manutenção do equilíbrio hidroeletrolítico, dentre eles a secreção de hormônios neurohipofisários. A privação hídrica em aves é um importante estímulo estressor que provoca uma ampliação da atividade dos neurônios dos NPV e NSO, denominados magnocelulares, e consequentemente um aumento no comportamento da ingestão de água em aves. Com isso, a privação hídrica se torna um modelo experimental conveniente para os estudos da atividade vasotocinérgica e mesotocinérgica, assim como estudos da interação desses peptídeos com seus respectivos receptores e sua ação central e sistêmica. Desta forma, o presente estudo investigou as possíveis correlações entre a atividade vasotocinérgica e mesotocinérgica em aves com as alterações comportamentais entre o mecanismo de sede e da ingestão de água, através de modelo experimental desenvolvido com codornas japonesas (Coturnix coturnix japonica), submetendo os grupos experimentais à privação hídrica. Foram utilizados codornas machos de aproximadamente 50 dias, mantidos sob temperatura controlada de 26±2ºC, ciclo claroescuro de 12/12 horas, subdivididas em 3 grupos distintos (n=6): i.Grupo Controle (CTRL), ii.Grupo Privado Hidricamente por 36 horas (PvH) e iii.Grupo Privado Hidricamente por 36 horas com Reapresentação de água durante duas horas (IH-2h). Verificamos que a privação hídrica foi capaz de aumentar a ingestão hídrica do grupo IH-2h, para todos os intervalos de tempo observados, quando comparado ao grupo CTRL e ao grupo IH-2 antes da privação (IH2h após privação vs CTRL, p < 0,0001; IH-2h após privação vs IH-2h antes da privação, p < 0,0001). O grupo PvH demonstrou diferença estatisticamente significativa quando comparado ao grupo CTRL na ingestão basal de água no tempo de 120 minutos (PvH 3,56±3,32 vs CTRL 0,79±0,70; p = 0,002). Houve redução do peso corporal de maneira significativa dos grupos PvH e IH-2h, quando considerada a variação de ganho de peso antes e após privação (PvH após privação vs CTRL, p < 0,0001 e IH-2h após privação vs CTRL, p<0,0001). Deste modo, o presente estudo foi capaz de demonstrar resultados positivos com relação ao comportamento ingestivo de água e suas possíveis influências no ganho de peso corporal da espécie após privação hídrica. Embora os resultados dos parâmetros plasmáticos avaliados neste estudo não permita afirmar que mecanismos de controle neuroendócrino vasotocinérgico e mesotocinérgico estejam envolvidos na privação hídrica, sugerimos que a ação dos hormônios AVT e MT tem importância impar no controle de líquidos corporais. Estudos posteriores são necessários, para que se possa elucidar o papel desses e outros hormônios envolvidos da osmorregulação de codornas japonesas.

Embora classicamente envolvido no controle cardiovascular e equilíbrio hidromineral, o sistema renina-angiotensina (SRA) tem sido implicado no controle do balanço energético. A angiotensina II (ANG II), atuando em receptores do tipo 1 (AT1) pode alterar a ingestão alimentar e o ganho de peso em modelos para indução de obesidade. Um dos principais locais de ação da ANG II circulante no sistema nervoso central é o órgão subfornical (SFO), desprovido de barreira hematoencefálica e relacionado com o controle de diversas funções autonômicas, comportamentos motivados e do metabolismo energético. Assim, nossa hipótese é que a ANG II pode atuar em receptores AT1 para promover o controle integrado do metabólico e hidroeletrolítico em desafios à homeostase energética. Tem-se três objetivos principais: a) investigar se um mesmo neurônio do SFO é sensível a ANG II e glicose, e se a concentração de glicose influencia a resposta à ANG II; b) avaliar se a privação alimentar, como estímulo hipoglicemiante, pode alterar a atividade do SRA circulante e a expressão de AT1 no SFO; c) e avaliar se a ANG II via receptores AT1 influência a ingestão de ração e/ou água após a privação alimentar. Para tal, foram usados ratos machos Sprague-Dawley e Wistar e todos os procedimentos foram aprovados por comitês de ética em uso de animais experimentais, respectivamente Queen’s University 2017-1735 e FMRP-USP 229/18. Observou-se que neurônios do SFO que respondem a ANG II podem ser encontrados em populações de diferentes fenótipos de glicossensibilidade, podendo ser tanto não glicossensiveis (43%), como glicoexcitáveis (52%) ou glicoinibidos (71%). Cultura de células do SFO mantidas em diferentes concentrações de glicose por 1, 6 e 24 horas não apresentaram diferença na expressão de receptores AT1. Mesmo assim, estudos eletrofisiológicos de patch-clamp de neurônios isolados do SFO mostraram que aproximadamente 31% (n=4/13) das células testadas não respondiam a ANG II a 5mM de glicose e passavam a apresentar despolarização a 10mM de glicose. Isso sugere uma inter-relação entre o estado metabólico do organismo e a forma como o sistema nervoso central responde à ANG II.  A privação de alimentos induziu o aumento da concentração plasmática de ANG II e do mRNA para receptores AT1a no SFO. O tratamento com losartana, um antagonista AT1, em baixas doses na água de beber durante 48h de jejum atenuou a queda da glicemia. Quando os animais receberam comida, apenas uma tendência de aumento da ingestão alimentar foi observada aos 60 min no grupo tratado com losartana na água. Entretanto, neste mesmo tempo, foi observada uma redução significativa da ingestão de água. Ainda, microinjeções intracerebroventriculares (i.c.v.) de losartana mostram uma significativa diminuição da ingestão comida e água após 12 horas em condições basais, mas depois de jejum de 48 horas apenas a ingestão de água foi significativamente reduzida pelo tratamento com losartana i.c.v. Assim, podemos concluir que SRA encontra-se ativado em condições de jejum, acompanhado de aumento na expressão de AT1 no SFO, e está relacionado com a ingestão de água durante a alimentação, como um importante mecanismo de manutenção do volume e osmolalidade do líquido extracelular durante a ingestão de alimentos.

A sede é uma sensação essencial para o desenvolvimento de alterações
comportamentais que culminem com a ingestão de água, resposta vital para a
manutenção da homeostase hidrossalina. Animais que passam por privação hídrica e/ou
alimentar em geral estão mais dispostos a assumir riscos para a sua sobrevivência, nesse
sentido, a privação hídrica e a sobrecarga salina foram estímulos utilizados para
desencadear a sede intracelular. Nessas condições a vasopressina (AVP) e ocitocina
(OT) são secretadas por neurônios magnocelulares através da neurohipófise e alcançam
a circulação sistêmica. A saber, recentes estudos demonstraram que neurônios
magnocelulares vasopressinérgicos se projetam para regiões extra-hipotalâmicas, que
incluem a habênula e a amígdala. Sendo assim, o presente estudo teve o objetivo de
analisar o efeito do aumento da osmolalidade plasmática nos comportamentos
exploratório e análogos a ansiedade em ratos submetidos à privação hídrica e sobrecarga
salina, além de avaliar a expressão gênica de receptores de AVP do tipo 1a (AVPR1a) e
OT (OTR), na amígdala basolateral, amígdala central e habênula, assim como, a enzima
que sintetiza GABA (GAD67) e o transportador vesicular de glutamato (VGLUT2)
nestes núcleos. Para tanto, ratos Wistar machos foram randomicamente separados em
cinco grupos experimentais: Controle (CT), privação hídrica por 24 horas (PH24h) e 48
horas (PH48h) e sobrecarga salina com NaCl 1,8% por 24 horas (SS24h) e 48 horas
(SS48h). Todos os grupos foram submetidos a análises plasmáticas, testes
comportamentais e análise da expressão gênica através de RT-qPCR. Todos os dados
são descritos como média ± erro padrão da média e as diferenças foram consideradas
significativas quando p < 0,05. A osmolalidade plasmática aumentou significativamente
nos grupos PH48h (p = 0,0039) e SS48h (p = 0,0176). No labirinto em cruz houve
aumento da porcentagem de entradas no braço aberto nos grupos PH48 (p= 0,0079) e
SS48h (p=0,0015), assim como, maior tempo dispendido nos braços abertos PH48h (p =
0,0029) e SS48h (p< 0,0001), indicando uma resposta claramento ansiolítica.
Adicionalmente, na regressão linear foi observada uma correlação diretamente
proporcional entre a osmolalidade plasmátia e o tempo de permanência no braço (p =
0.0004, r = 0,259). No campo aberto nenhuma diferença foi observada, indicando que
os animais não aumentaram a atividade locomotora espontânea. Já na caixa claro e
escuro apenas o grupo PH48h (p = 0,0424) apresentou aumento no tempo de
permanência na área clara. Em relação a expressão gênica, observamos aumento
signicativo na expressão de AVPR1a (p = 0,0345) e OTR (p = 0,0103) no grupo PH48h
na amígdala. Nossos resultados indicam que a hiperosmolaridade plasmática induzida
por 48horas de privação hídrica ou sobrecarga salina é capaz de suscitar
comportamentos ansiolíticos em ratos e é possível que os receptores de AVPR1a e OTR
medeiem essa resposta na amígdala central.