Banca de QUALIFICAÇÃO: ERIKA DA COSTA FERNANDES

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : ERIKA DA COSTA FERNANDES
DATA : 10/07/2019
HORA: 09:00
LOCAL: Sala 1 do PPGF
TÍTULO:

Caracterização de Transportadores de Nitrato envolvidos na Remobilização do Nitrogênio armazenado no vacúolo em Arroz

PALAVRAS-CHAVES:

Transportador de baixa afinidade, NPF, Oryza sativa, transportadores tonoplasto

PÁGINAS: 30
RESUMO:

A absorção e remobilização do nitrato nas células são de extrema importância para o suprimento do nitrogênio necessário para o desenvolvimento da planta. A identificação das proteínas transportadoras que realizam estes processos permite esclarecer o funcionamento destas vias e, assim, delinear estratégias a fim de aumentar a eficiência do uso deste nutriente. Desta forma, o objetivo deste trabalho é a identificação e caracterização de proteínas transportadoras responsáveis pela remobilização do nitrato acumulado no vacúolo. Para isso, foram reunidas sequencias de proteínas de transportadores de nitrato da família NPF com possível localização no vacúolo e foi realizada uma análise filogenética, utilizando sequencias de proteínas já caracterizadas para confrontar. Em seguida foi montado um experimento para avaliar a cinética de absorção de nitrato submetendo as plantas a um período de supressão de nitrogênio (N-NO₃^-) por 72 horas, onde foram realizadas coletas de material vegetal a cada 24 horas, seguido do ressuprimento do fornecimento de 5mM N-NO₃^- onde coletou-se nos tempos 4, 8, 24 e 72 horas. Com o material coletado foram avaliadas as frações solúveis na planta, metabolismo de nitrogênio e expressão dos genes selecionados. Um total de 71 genes foram utilizados na criação da árvore filogenética que possibilitou a formação de três grandes grupos. O terceiro grupo reuniu os genes da família NPF, por ser um grupo muito grande foi subdividido em 6 subgrupos, destes o subgrupo 6.3 reuniu os genes caracterizados como responsáveis pelo efluxo de nitrato do vacúolo em Arabidopsis e os genes da família NPF5 de Arroz sendo selecionados para análise de expressão. E o subgrupo 6.4 agrupou genes da família NPF7 incluindo o gene NPF7.2 responsável pelo influxo de nitrato no vacúolo, também, selecionada para análise de expressão. Com o experimento foi possível determinar que o período de 72 horas de supressão de nitrogênio na solução não foi suficiente para zerar os estoques de nitrato na planta. Entretanto o tecido da bainha é o órgão responsável pelo acúmulo e translocação de nitrato visto que seus teores decrescem com maior intensidade nos períodos de supressão e não foi detectado níveis significantes de atividade da enzima nitrato redutase em nenhum momento. A análise de expressão demonstrou que os genes OsNPF5.12, OsNPF5.13, OsNPF5.15, OsNPF5.16 isoforma 1 e OsNF5.17 apresentaram aumento dos níveis de expressão em resposta a supressão do fornecimento de nitrogênio o que indica uma possível relação com o efluxo de nitrato, enquanto os genes OsNPF7.1, OsNPF7.7 e OsNPF7.8 apresentaram maior resposta no período de ressuprimento o que pode estar relacionado ao influxo de nitrato no vacúolo. Para confirmar essa relação os genes foram clonados fusionados com uma proteína de fluorescência e inseridos em um vetor de transformação genética para posterior localização subcelular.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 002.180.573-34 - MANLIO SILVESTRE FERNANDES - UFRRJ
Interno - 1712769 - PEDRO CORREA DAMASCENO JUNIOR
Externo ao Programa - 1809123 - ANDRE MARQUES DOS SANTOS
Externo à Instituição - MARCIA SOARES VIDAL - UFRJ