Uso de inoculante produzido em co-cultivo de duas espécies de bactérias diazotróficas para fins de promoção de crescimento de milho
Bactérias promotoras de crescimento, cultivo simultâneo, fitohormonios
A seleção de bactérias diazotróficas para cultivos de importância agrícola permitem diminuir a perda de fertilizantes nitrogenados e aumentar os ganhos de produtividade. A promoção de crescimento vegetal pelo maior estímulo a absorção de nutrientes, especialmente os de maior mobilidade nos solos, faz-se uma importante alternativa para aumentar a renda do produtor rural. Essa pesquisa buscou empregar diferentes técnicas microbiológicas para esclarecer o estabelecimento e a eficiência de inoculantes mistos (co-cultivo), comparando-o aos inoculantes individuais de bactérias diazotróficas selecionadas para aplicação em cana-de-açúcar. O objetivo foi avaliar a eficiência de um inoculantes contendo Gluconacetobacter diazotrophicus (Gd-BR11281) e Paraburkholderia tropica (Pt-BR11366) co-cultivadas no desenvolvimento inicial e na arquitetura radicular de milho usada como planta modelo de promoção vegetal e analisar a produção de fitormônios no co-cultivo comparado ao crescimento individual das duas estirpes. O estabelecimento das bactérias inoculadas também foi observado usando a técnica de FISH e qPCR. Complementando o estudo foram realizados bioensaios com diferentes concentrações de reguladores de crescimento como o AIA, GA3 e a Zeatina no crescimento inicial das raízes de milho e comparação da com os efeitos da inoculação e a quantificação da produção de fitormônios pelas estirpes estudadas através da técnica de monitoramento de íons selecionados por GC-MS. Os experimentos em casa de vegetação foram avaliados os ganhos de massa e os parâmetros radiculares. As duas estirpes se adaptaram bem as condições de cultivo e apesar do metabolismo distinto não houve inibição de crescimento entre elas, sendo possível produzir o inoculante a partir do cultivo simultâneo. Pt-BR11366 obteve um crescimento 10 vezes superior em relação a Gd-BR11281. Os bioensaios mostraram que 40 ŋM de AIA e 20 µM de GA3 e Zeatina estimulam o crescimento radicular do milho, comparado ao controle sendo comparado ao co-cultivo e ao sobrenadante, sem a presença das células. Estes apresentaram incrementos de 69 e 84% para comprimento, 47 e 50% para os parâmetros área projetada e superfície de área e 28 e 22% para volume, respectivamente. Além disso as respostas de crescimento radicular do co-cultivo e do sobrenadante foram semelhantes as respostas da melhor concentração dos fitormônios testados. Esses resultados foram corroborados com a quantificação dos fitormônios que mostrou que o cultivo simultâneo tem maior concentração de AIA (19,6 ng/mL), GA3 (20,5 nm/mL) e Zeatina (10,7 nm/mL) que os cultivos individuais e a extração do sobrenadante intensificou essas concentrações: AIA (29,8 ng/mL), GA3 (29,1 nm/mL) e Zeatina (14,3 nm/mL). A técnica FISH permitiu a visualização das estirpes no interior das raízes e comprovando que as bactérias inoculadas se estabelecem no interior da planta e que ambas coabitam os mesmos nichos preferindo as regiões do apoplasto, superfície radicular, ponta, pelos radiculares e zonas de diferenciação das raízes secundárias. Milho inoculado com as duas bactérias co-cultivadas diferiu do tratamento com elas aplicadas separadamente, sendo estes superiores ao controle.