A membrana da casca do ovo de galinha é um biomaterial natural que tem ganhado cada vez mais atenção na área biomédica devido às suas propriedades únicas, versatilidade e sustentabilidade. O objetivo do presente estudo foi desenvolver uma metodologia de preparo da membrana da casca do ovo de galinha (Gallus gallus domesticus) para ser utilizada como material curativo bioativo no tratamento das injúrias da superfície ocular. Foram utilizados 12 ovos vermelhos de galinha, adquiridos no mercado local. O método utilizado foi a extração manual direta da membrana da casca. Após a lavagem com solução fisiológica, a membrana foi dividida em 3 fragmentos (Grupo controle; Grupo tratamento 1 – ácido peracético 0,1%; Grupo tratamento 2 – ácido peracético 0,2%) e cada fragmento dividido em 4 partes. Em todos os grupos, a primeira parte foi acondicionada em um frasco contendo formol a 10% e enviada para análise histológica. A segunda parte foi subdividida em 2 frações, sendo a primeira inoculada em caldo de infusão cérebro-coração (BHI) e a segunda inoculada em caldo de Tetrationato.  A terceira parte foi inoculada em Agar Sabouraud com cloranfenicol. A quarta parte foi acondicionada em um frasco contendo glicerol a 99% estéril e conservada por 30 dias em temperatura ambiente. Em ambos os tratamentos, os fragmentos foram acondicionados em Erlenmeyer contendo 20ml de ácido peracético (Perax Rio 0,2^®) e mantidos sob leve agitação por 20 minutos em temperatura ambiente Em seguida, os fragmentos foram submetidos a 3 lavagens de 15 minutos cada uma, em 20ml de PBS estéril (pH 7,0), que era trocado a cada lavagem. Esse processo foi realizado em temperatura ambiente com leve agitação. Após a lavagem com PBS, cada fragmento foi dividido em 4 partes. As etapas seguintes foram as mesmas aplicadas à metodologia do grupo controle. A análise histológica comprovou que tanto a glicerolização quanto a esterilização com o ácido peracético não promovem toxicidade celular e destruição das células do tecido. Na análise microbiológica constatou-se que o tratamento com o ácido peracético reduz efetivamente a população microbiana em ambas as concentrações. Com o presente estudo foi possível concluir que a extração manual é um método que pode ser usado para extrair a membrana da casca do ovo sem comprometer sua estrutura ou suas características físico-químicas; a esterilização da membrana da casca do ovo é viável, principalmente quando utilizado na concentração de 0,2% e que o glicerol é um bom meio de preservação.