Banca de DEFESA: LUCAS AGUIAR ROSA MACHADO

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : LUCAS AGUIAR ROSA MACHADO
DATA : 22/09/2026
HORA: 13:00
LOCAL: Departamento de Parasitologia Animal Anexo 1 Instituto Veterinaria
TÍTULO:

Validação e Implementação em Nível Nacional de uma Plataforma “On-line” para Identificação Molecular de Carrapatos Brasileiros.

PALAVRAS-CHAVES:

carrapatos; Amblyomma; PCR-RFLP; identificação molecular; vigilância; Tick Cutter.

PÁGINAS: 120
RESUMO:

A identificação de carrapatos ao nível de espécie é fundamental para estudos ecológicos, epidemiológicos e de vigilância, porém permanece particularmente limitada nos estágios imaturos, sobretudo em larvas do gênero Amblyomma. Esta tese avaliou esse déficit no contexto brasileiro e desenvolveu e aperfeiçoou o Tick Cutter, uma plataforma hierárquica baseada em PCR-RFLP destinada a ampliar a capacidade de identificação molecular de carrapatos, utilizando o sequenciamento de forma seletiva para confirmação e resolução de casos não discriminados. Inicialmente, foi realizada uma revisão estruturada dos estudos sobre carrapatos associados às aves no Brasil. Nos estudos com denominadores reconstruíveis publicados entre 2007 e 2016, 5.269 de 7.244 espécimes de Amblyomma (72,7%) permaneceram sem identificação específica, enquanto, no período de 2017 a 2026, essa condição ocorreu em 1.368 de 2.272 espécimes (60,2%), permanecendo fortemente concentrada nas larvas. Para estruturar uma alternativa operacional a esse problema, sequências do gene mitocondrial 16S rDNA disponíveis em bancos públicos foram recuperadas, padronizadas e submetidas à curadoria taxonômica e molecular. O conjunto final compreendeu 1.708 sequências atribuídas a 74 espécies e originou 171 variantes combinadas de perfis de restrição. As enzimas DraI e VspI constituíram o eixo principal de discriminação, enquanto ApoI, DdeI, HinfI e XbaI foram incorporadas como enzimas auxiliares para grupos específicos. Essas informações foram convertidas em chaves dicotômicas e nas configurações de consulta C2 e C do sistema Tick Cutter. Uma prova de conceito experimental foi conduzida com amplicons de referência previamente sequenciados para examinar a correspondência entre perfis previstos in silico e aqueles observados experimentalmente e orientar o refinamento da plataforma. O sistema foi posteriormente aplicado a duas coleções independentes. Na coleção de carrapatos de vida livre, 329 de 330 imaturos de Amblyomma processados individualmente (99,7%) receberam identificação específica por um fluxo que integrou PCR-RFLP do 16S, diluição, reextração, nested-PCR de cox1 e sequenciamento seletivo. Na coleção de carrapatos associados às aves, composta por 263 larvas e ninfas provenientes do Parque Nacional do Itatiaia, o fluxo hierárquico permitiu a atribuição dos espécimes ao nível de espécie, empregando HinfI como triagem inicial e procedimentos complementares quando necessários. Os resultados demonstram a viabilidade do Tick Cutter como uma camada intermediária entre a identificação morfológica e o sequenciamento, permitindo concentrar procedimentos de maior complexidade nas amostras ambíguas, incomuns ou de maior interesse. Entretanto, os resultados constituem prova de conceito e aplicações em conjuntos definidos, e não uma validação diagnóstica definitiva. A consolidação da plataforma dependerá de avaliações cegas e independentes, comparações interlaboratoriais, ampliação contínua das referências e análise prospectiva de custo e desempenho. Em conjunto, os resultados demonstram o potencial de abordagens moleculares hierarquizadas para ampliar a identificação de carrapatos imaturos e contribuir para a produção de dados taxonômicos mais completos e comparáveis em estudos ecológicos e de vigilância.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1354903 - DOUGLAS MCINTOSH
Interno - 3701492 - HUARRISSON AZEVEDO SANTOS
Interna - 3247559 - BRUNA DE AZEVEDO BAETA
Externa ao Programa - 1815763 - IRENE DA SILVA COELHO - UFRRJExterno à Instituição - HERMES RIBEIRO LUZ - UFMA
Externo à Instituição - LUIZ CARLOS SARAMAGO GONÇALVES - UFRJ
Externa à Instituição - MARIA HALINA OGRZEWALSKA - FIOCRUZ