Banca de DEFESA: WELLINGTON OLIVEIRA DA CRUZ

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : WELLINGTON OLIVEIRA DA CRUZ
DATA : 06/08/2019
HORA: 13:00
LOCAL: Sala 50 do prédio de Química
TÍTULO:

CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DE PROTEASES DIGESTIVAS EM LARVAS DE Alphitobius diaperinus (COLEOPTERA: TENEBRIONIDEA).

PALAVRAS-CHAVES:

Inseto, Dietas, Inibidor, Proteína

PÁGINAS: 172
RESUMO:

O Alphitobius diaperinus é considerado uma praga importante em ambiente aviário. O estudo do seu comportamento, hábitos alimentares e enzimas digestivas, podem indicar alvos importantes no seu controle. O controle do A. diaperinus é considerado difícil, seus inimigos naturais são pouco conhecidos e até os dias de hoje não existe nenhum método eficiente e seguro. As proteases digestivas de insetos catalisam a produção de peptídeos e aminoácidos de uma dieta protéica e são encontradas na região do intestino médio do intestino médio dos insetos. O objetivo desse trabalho foi caracterizar as proteases presentes no trato digestivo de A. diaperinus. As atividades proteolíticas foram determinadas utilizando azocaseína e substratos especificos. O extrato bruto do homogeneizado de intestino de A. diaperinus mostrou atividade contra azocaseína e Abz-Phe-Arg-MCA e foi inibida em mais de 50% pelo inibidor da cisteíno protease E-64 e foi ativada por DTT 2,0mM em pH ácido, o que sugere que os substratos estão sendo hidrolisada por cisteíno protease. Nove bandas foram detectadas com atividade proteolítica e peso molecular na faixa 10kDa – 100kDa por zimograma, utilizando gelatina 0.1% como substrato. Para determinar quais classes de proteases estavam presentes no homogeneizado, inibidores de proteases clássicos como E-64, iodoacetamida e ácido acético (inibidores de Cisteíno protease), PMSF, SBTI, Aprotinina (Inibidor de Serino protease) e TLCK (Inibidor de Cisteíno e Serino protease), foram utilizados. Foi observado a presença de atividade proteolitica em todos os pHs analisados, porém entre os pHs 5 e 6 foi registrado maior potencial da atividade em relação a os outros pHs, corrobarando com os dados encontrados na literatura, onde o sistema de digestão do A. diaperinus apresenta pHs mais ácidos. Embora tenham sido observadas combinações de serino e cisteíno proteases, proteases com caracter ácido apresentaram maiores niveis de atividade proteolitica no modelo estudado. Os resultados observados em zimograma, utilizando gelatina 0,1% como substrato, na presença de inibidor E-64 confirmam a presença de cisteíno protease na faixa de peso molecular entre 20 kDa a 30 kDa. Os íons Ca2+ aumentaram a atividade da enzima em concentrações maiores que 2,0 mM e 10 mM, em 14% e 34%, respectivamente. Insetos mantidos em diferentes dietas, tanto na formulação como nas concentrações utilizadas, viii apresentaram diferença significativa na atividade proteolítica determinada nas larvas de A. diaperinus. A separação eletroforética unidimensional das proteínas intestinais das larvas de A. diaperinus, seguida de separação, extração das bandas e análise de nano-HPLC bidimensional e ESI-MS/MS resultaram na identificaçao de diferentes classes de proteases. PALAVRAS CHAVES: (Inseto, Dietas, Inibidor, Proteína)

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1555317 - EMERSON GUEDES PONTES
Interno - 1220404 - CARLOS MAURICIO RABELLO DE SANTANNA
Interno - 1681790 - CRISTIANE MARTINS CARDOSO DE SALLES
Externo à Instituição - DANIELLE MARIA P. DE OLIVEIRA SANTOS - UFRJ
Externo à Instituição - RAFAEL DIAS MESQUITA - UFRJ